导　　师： 田静

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 深圳大学

摘　　要： 硒元素在生物体内的功能主要通过各种硒蛋白实现的。15 kDa硒蛋白（Sep15）是人体中25种硒蛋白之一,目前对Sep15的转录调控研究未见报道。本研究主要从转录调控机制以及Sep15在内质网中的功能进行研究,来探讨Sep15的生物学功能。本研究通过生物信息学预测发现,人Sep15基因上游-2055/-248存在热休克转录因子1（HSF1）的结合位点,提示Sep15的基因表达可能受到HSF1的调控。将含有Sep15的核心启动子区域:-818/-248片段的荧光素酶报告基因的启动子活性检测载体（pGL4）和HSF1,共转染HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告系统（DLR）、实时荧光定量（Q-PCR）和蛋白免疫印迹（WB）分别检测Sep15的核心启动子活性、mRNA水平和蛋白水平。结果显示,过表达HSF1能增强Sep15的核心启动子活性、促进Sep15的转录,提高Sep15的蛋白表达水平。通过染色质免疫共沉淀方法（CHIP）验证了HSF1能结合到Sep15启动子上的5个片段,且其中一个在核心启动子上。热激能够诱导HSF1入核调节相关基因转录。将细胞进行热激处理后,利用双荧光素酶报告系统（DLR）、实时荧光定量（Q-PCR）和蛋白免疫印迹（WB）分别检测Sep15的核心启动子活性、mRNA水平和蛋白水平。结果显示,热激能增强Sep15的核心启动子活性、促进Sep15的转录,提高Sep15的蛋白表达水平。内质网应激诱导剂衣霉素（Tm）能够上调Sep15表达,且通过复杂的信号通路诱导HSF1调节相关基因表达。Tm处理细胞后,运用双荧光素酶报告系统（DLR）、实时荧光定量（Q-PCR）和蛋白免疫印迹（WB）分别检测Sep15的核心启动子活性、mRNA水平和蛋白水平。结果显示,与过表达HSF1结果类似,Tm处理显著提高了Sep15的核心启动子活性;在Tm处理的同时过表达HSF1,对核心启动子活性提高的效果进一步增强。在HEK293T细胞中,Sep15的转录水平随着Tm处理时间的延长而提高;而在N2a

关 键 词： 硒蛋白 热休克转录因子 内质网应激

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