导　　师： 王翀

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 初生仔猪产热不足，主要依赖电能供暖，造成巨大能源损耗和经济损失。大多数哺乳动物体内存在棕色脂肪可进行非战栗产热，以应对寒冷环境。UCP1是棕色脂肪最直接分子标记，棕色脂肪非战栗产热的本质就是UCP1蛋白介导的解偶联呼吸产热。PGC-1α是线粒体生成和线粒体能量代谢重要的调控因子，在 UCP1功能发挥及哺乳动物非战栗产热过程中起着重要的调控作用。哺乳动物如人、羊和小鼠体内都存在棕色脂肪，但猪是否存在棕色脂肪，一直存在争议。通过探究仔猪产热不足的分子机制，并修复初生仔猪产热功能，不仅可以解决长期以来猪是否存在棕色脂肪的争议，并且对于人类医学解析由于肥胖引起的相关疾病如糖尿病等研究具有一定启示。获得的小鼠UCP1和猪PGC-1α基因发生同源重组阳性单克隆胎儿成纤维细胞，可用于制备寒冷耐受非战栗产热的转基因猪，为未来培育节能减排型猪新品种提供供体细胞。　　本研究以猪为研究对象，制备猪 UCP1特异抗体，探究猪 UCP1基因是否发生转录、翻译，明确猪体内是否存在棕色脂肪;其次以猪前体脂肪细胞为研究对象通过检测细胞氧气消耗量变化明确过表达UCP1和PGC-1α基因后细胞发生棕色化获得解偶联呼吸功能，并通过蛋白质免疫共沉淀和染色质免疫共沉淀技术探究其棕色化的分子机制;最后通过构建同源重组载体，通过 CRISPR/Cas9技术在猪基因组 H11位点定点插入外源基因，筛选获得可用于体细胞核移植的阳性猪胎儿成纤维细胞，获得主要结果如下：　　1、通过3’RACE试验获取猪UCP1基因的转录本，发现UCP1基因在猪体内仅有外显子1、2发生转录;通过制备猪UCP1特异性的抗体，检测发现1日龄和7日龄仔猪体内各个部位脂肪组织均不表达UCP1蛋白，即仔猪体内不存在棕色脂肪。　　2、分别在前体脂肪

关 键 词： 猪 解偶联呼吸 脂肪细胞 棕色化 分子标记

领　　域： []