导　　师： 夏军红

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 中山大学

摘　　要： 神经激肽B(Neurokinin B,NKB)和促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone,GnRH)在脊椎动物生殖调控中起着关键作用。NKB是速激肽家族的成员,由tac2/3基因编码。研究表明,人类中NKB/NK3R无效突变导致先天性促性腺激素功能减退症(isolated hypogonatropic hypogonadism,IHH),在小鼠研究中的研究也显示NKB/NK3R无效突变会导致低促性腺素性腺功能减退和不育。GnRH在脊椎动物的下丘脑-垂体-性腺轴中起主要调节功能,刺激卵泡刺激素和促黄体激素的合成与分泌。为了研究它们在鱼类生殖系统中的功能,本研究通过转录激活剂样效应核酸酶(Transcription Activator-like Effector Nucleases,TALEN)技术,建立了tac3atac3b、tac3agnrh3和tac3atac3bgnrh3斑马鱼品系,研究NKB和GnRH3信号缺失对斑马鱼生殖的影响。主要研究结果如下:1、通过测序进行筛选和传代,我们成功从P0代嵌合体斑马鱼中获得tac3a、tac3b和gnrh3纯合单突变的斑马鱼品系,并且编码NKB和GnRH3成熟肽的序列提前出现终止密码子。通过对tac3a、tac3b和gnrh3纯合单突变的斑马鱼品系进行杂交筛选获得tac3atac3b、tac3agnrh3和tac3atac3bgnrh3斑马鱼品系,并通过定量PCR证实tac3a、tac3b和gnrh3在对应突变斑马鱼品系中已被成功敲除。2、在tac3atac3b斑马鱼品系中,其生长发育不受影响,成熟个体能正常进行配子发生和繁殖,同时发现tac3a和tac3b的基因表达存在补偿效应。在tac3agnrh3斑马鱼品系中,其生长发育比野生型斑马鱼发育慢,但成熟个体能正常进行配子发生和繁殖。3、在tac3a、tac3b和gnrh3基因全部突变的斑马鱼中,其生长发育在性别分化、青春期启动和性腺成熟阶段均比野生型斑马鱼发育慢。同时,在tac3atac3bgnrh3斑马鱼品系中,成熟个体中没有发现雌鱼,均为雄鱼。进一步研究表明,NKB和GnRH3对其性腺表型的影响发生在性别分化时期。在性别分化之前通过投喂NKB和LHRH多肽

关 键 词： 基因敲除 生殖

领　　域： []