导　　师： 杨洁

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 目的:　　流感是严重危害人类健康的传染性疾病。历史上已出现多次的流感大流行，波及范围广，死亡率高。由于流感病毒抗原性转变和抗原性漂移的存在，流感病毒具有极高的变异性，新型流感病毒的出现已对人类的生存造成了严重的影响。　　流感的防治，尤其是药物治疗，迫在眉睫。迄今为止，在全球临床应用的抗流感药物主要有神经氨酸酶抑制剂和M2离子通道抑制剂两类，但药物耐药性及毒副作用等问题一直困扰着这些药物的发展和应用。目前用于流感病毒感染预防和治疗的化学合成药物十分有限。因此，从天然产物中寻找低毒有效的抗流感病毒中药显得尤为重要。　　《时病论》清热保津法曾收载复方石斛汤可治温热有汗，风热化火，热病伤津等，其中石斛具有广泛的生物学活性，包括益胃生津，润肺止咳、滋阴清热等，常用于口干烦渴、热病伤津、病后虚热等多种病症。石斛碱一种从金钗石斛中提取出来的主要生物碱。本项目通过研究石斛碱抗甲型流感病毒活性及其作用机制，揭示其作用靶点，以期充分挖掘石斛的药用价值，为开发具有自主知识产权的新型抗流感药物奠定基础，为流感的防治提供新的思路。　　方法:　　1.MTT法与空斑实验检测石斛碱的细胞毒性及抗甲型流感病毒的活性。　　2.Western blotting、免疫荧光和qRT-PCR检测石斛碱对流感病毒复制的影响。　　3.血凝抑制实验、SPR实验、H5N1假病毒体系、神经氨酸酶抑制实验和time-of-addition实验研究石斛碱作用机制。　　4.Mini-replicon实验、定点突变技术、免疫共聚焦和计算机模拟分子对接技术研究石斛碱的作用靶点。　　结果:　　1.石斛碱能够有效地抑制多种甲型流感病毒的感染，包括A/Aichi/2/68(H3N2)，A/FM1/47(H1N1)和A/Puerto Rico/8/34H274Y(H1N1)，IC50分别是5.32±1.68，3.3

关 键 词： 流感 石斛碱 蛋白 抗病毒活性 病毒复制

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