导　　师： 吉坤美

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 深圳大学

摘　　要： 尘螨是世界上分布最广泛的过敏原,与哮喘的发生高度相关,是世界性的最主要过敏原。粉尘螨(Dermatophagoides farinae,Der f)是我国诱导尘螨过敏反应的主要物种。目前已分离鉴定了37种粉尘螨过敏原组分,均为蛋白质。课题组完成了粉尘螨的二代基因组和转录组测序及其图谱初步组装,并发现了一种新的过敏原,泛醌细胞色素C还原酶结合蛋白(Ubiquinol-cytochrome C reductase binding protein,UQCRB)同源物,命名为Der f24。但是,粉尘螨肠道中拥有丰富的微生物菌群,这影响着粉尘螨基因组提取的纯度。从而需要一种减少微生物菌群数量的基因组提取方法提高粉尘螨基因组图谱组装的质量。另外,利用新型方法筛选粉尘螨新过敏原组分对于尘螨过敏性疾病的病理认识,疾病诊断与治疗有着实质性的指导意义。研究发现Der p23是继Der p1和Der p2后的又一个尘螨主要过敏原,通过结晶已解析Der p1,2蛋白结构,临床上更多针对主要过敏原进行药物研发。课题组发现Der f23与Der p23同样具有较强的过敏原性,通过解析蛋白结构可加深对主要过敏原的认识并为开发尘螨疫苗提供思路。目的:1.建立高纯度的粉尘螨基因组提取方法:分离提取粉尘螨虫卵进行DNA测序;比较粉尘螨虫卵和粉尘螨的微生物数量、含量、种类的差异;粉尘螨转录组第三代DNA测序;2.筛选粉尘螨新过敏原组分:建立粉尘螨cDNA文库;与WHO/IUIS过敏原命名数据库同源比对筛选;原核表达系统表达纯化重组蛋白与过敏原性鉴定;3.Der f23蛋白结构解析:重组蛋白结晶探索与其结构解析。方法:1.粉尘螨物种的人工纯化培养,分离豆粉培养基,虫卵,粉尘螨虫体;PCR鉴定粉尘螨物种;2.分离好的粉尘螨提取RNA,反转录成cDNA,检测cDNA质量,;3.粉尘螨虫卵基因组测序;4.随机选取各100万条(1MB)粉尘螨虫卵基因组和粉尘螨基因组序列,与NCBI的nt数据库比对,分析两

关 键 词： 粉尘螨 虫卵 基因组 过敏原 晶体

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