导　　师： 彭宏

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 目的：　　明确端粒酶抑制因子PINX1在鼻咽癌中的表达水平，从突变、DNA甲基化以及转录调控多方面探讨PINX1表达异常的分子机制，并应用细胞功能实验验证新的信号通路。　　方法：　　应用荧光定量PCR法、免疫组织化学染色法检测及评估PINX1在鼻咽癌组织和正常鼻咽部组织中的表达差异;应用荧光定量PCR法、Western Blot法检测PINX1在鼻咽癌细胞系和永生化鼻咽部上皮细胞系(NP69)、肾上皮细胞系(293T)中的表达差异;应用PCR法测序分析鼻咽癌细胞系中PINX1基因的缺失、插入、突变情况;应用亚硫酸盐测序法(BSP)、甲基化敏感的高分辨率熔解曲线法(MS-HRM)检测鼻咽癌细胞系及NP69的PINX1的甲基化程度;应用去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycitydine，5-aza-2'-dC)处理鼻咽癌细胞系后，荧光定量PCR法检测药物处理前后PINX1mRNA的表达水平;在鼻咽癌细胞5-8F中过表达EBV潜伏膜蛋白LMP1，应用Western Blot法检测核因子NF-κB及PINX1的蛋白表达变化;应用生物信息学方法预测PINX1启动子区潜在的NF-κB结合位点，并通过染色质免疫共沉淀法(ChIP)以及双荧光素酶报告基因法验证;应用TRAP-SYBR Green法、Southern Blot法检测受PINX1调控的端粒酶活性、端粒长度;应用CCK8法、EdU法检测肿瘤细胞的增殖能力以验证信号通路。　　结果：　　在正常鼻咽部上皮组织中PINX1mRNA的表达水平显著高于鼻咽癌组织(p＜0.001);免疫组织化学结果显示PINX1蛋白在79.1％(34/43)的正常鼻咽部上皮组织中高表达，而在82.6％(38/46)的鼻咽癌组织中低表达(p＜0.001);PINX1mRNA及蛋白在鼻咽癌细胞中的表达普遍低于NP69和293T(p＜0.001);鼻咽癌细胞系CNE-1、CNE-2、HONE1、5-8F的PINX1全外显子测序结果显示7号外显子发生Ser254Cys错义突变，提示为良性多态性，其余外显子未发现突变、插入、缺失等变异;BSP、MS-HRM法显示鼻咽癌细胞

关 键 词： 鼻咽癌 病理机制 基因 基因表达 信号通路 细胞增殖