导　　师： 刘丽

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广东海洋大学

摘　　要： 近年来,由于环境恶化和人类活动的不断增加,致使海洋生态系统严重失衡。作为海洋中的低等无脊椎动物,珊瑚礁正面临着严重的危机,为了了解造礁石珊瑚的钙化机制,以更好的保护珊瑚礁生态系统,许多研究者开始致力于对珊瑚钙化相关基因的功能进行研究。本研究以稀杯盔形珊瑚为实验对象,对钙调素类似蛋白基因、钙网蛋白基因和碳酸酐酶基因进行克隆和原核表达,并对钙调素类似蛋白基因在温度胁迫下以及钙通道抑制剂——异搏定处理后的表达模式进行了探讨,研究结果如下:1.稀杯盔形珊瑚钙调素类似蛋白基因（calmodulin-like protein,Ca LP）c DNA全长1290bp,其中5’UTR为109bp,3’UTR为683bp,开放阅读框498bp,编码165个氨基酸残基,蛋白分子质量为18.89 k Da,理论等电点4.22。运用p ET-32a载体和BL21（DE3）菌株构建蛋白原核表达系统,成功表达了Ca LP重组蛋白,并以可溶性蛋白的形式存在。实时荧光定量结果表明在20℃和30℃时其表达随着时间延长总体上呈现先上升后下降的趋势。另外,在钙通道抑制剂异搏定处理后,Ca LP基因表达明显下调。2.稀杯盔形珊瑚钙网蛋白基因（calreticulin,CRT）c DNA全长1792bp,其中5’UTR为77 bp,3’UTR为380bp,开放阅读框1335bp,编码444个氨基酸残基,蛋白分子质量为51.85 k Da,理论等电点4.43。通过构建原核表达系统得到CRT重组蛋白,纯化后的重组蛋白可以促进革兰氏阳性菌藤黄微球菌和革兰氏阴性菌大肠杆菌凝集,具有细菌凝集活性。3.稀杯盔形珊瑚碳酸酐酶基因（carbonic anhydrase,CA）c DNA全长1120bp,其中5’UTR为148 bp,3’UTR为228bp,开放阅读框744bp,编码247个氨基酸残基,蛋白分子质量为27.54 k Da,理论等电点5.88。通过构建原核表达系统,诱导表达了与预计分子量大小一致的特异性融合蛋白,0.2 mmol/L为最佳IPTG诱导浓度,37℃为最佳诱导温度,目的蛋白以包涵体形式�

关 键 词： 稀杯盔形珊瑚 钙调素类似蛋白 钙网蛋白 碳酸酐酶

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