导　　师： 何业华

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 菠萝（Ananas comosus L.）为凤梨科多年生草本植物，是世界重要的热带果树之一。菠萝SERK1基因（AcSERK1）是菠萝体细胞胚发生的标记基因（Molecular marker gene），在诱导菠萝体细胞获得胚性能力的过程中发挥着重要的功能，该基因已被证明能有效提高菠萝体细胞胚的发生能力。深入研究菠萝体细胞胚发生初期 AcSERK1特异性表达调控的分子机制对揭示细胞分化、胚发生和胚早期退化等的分子机理，以及提高体细胞胚的发生频率和同步化水平有着重要意义。本论文在鉴定了AcSERK15’上游调控序列的胚性细胞特异启动活性的基础上，进一步分离并鉴定了其5’上游调控序列中具有生物学功能的胚性细胞特异性区段，通过酵母单杂交实验对与该区段互作的候选蛋白进行了筛选。并在表观遗传学水平分析了AcSERK15’上游调控序列中CpG岛的甲基化状态以及甲基化作用对AcSERK1表达的影响。这些研究在解析AcSERK1转录调控的分子机制的同时，也为研究菠萝体细胞胚发生的分子调控网络奠定了基础。获得的主要研究结果如下：　　采用hi-TAIL PCR技术，从‘神湾’菠萝基因组DNA中克隆了AcSERK1起始密码子5’上游序列2503 bp。NCBI在线BLAST结果表明，AcSERK1起始密码子上游2348 nt到2503 nt序列与菠萝PPO1基因有155 bp的序列同源，表明已获得了AcSERK1启动子转录起始位点（TSS）上游序列2090 bp（Genbank：KM264323）。PlantCare预测AcSERK1启动子序列包含TATA-BOX、CAAT-BOX等真核生物启动子核心元件及9个激素响应元件、19个环境响应元件等。　　为探讨AcSERK1转录调控规律，对其5’上游调控序列的TSS及启动活性进行了分析鉴定。采用5’-RACE技术鉴定出其TSS位于起始密码子（ATG）上游258 nt（G）处。以AcSERK15’上游调控序列取代pBI121中的CaMV35S启动子，构建了植物表达载体pAS2（-2090~+258）::GUS，�

关 键 词： 菠萝 基因 启动子 胚性细胞特异性 转录调控

领　　域： []