导　　师： 陈金顶

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 猪瘟（classical swine fever,CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的猪的高度传染性疾病,给全世界养猪业造成了巨大的经济损失。目前,疫苗接种仍是CSF的主要防控手段,然而猪瘟兔化弱毒疫苗缺乏合适的免疫学标记物,无法在血清学上区分感染和免疫动物（Differentiating infected from vaccinted animals,DIVA）,给我国CSF净化和防控带来巨大的困难。CSFV E2蛋白是CSFV的主要抗原蛋白,是猪瘟亚单位疫苗研制的理想候选蛋白。但由于猪瘟E2亚单位疫苗抗原单一,在实际使用中并不能达到理想效果,故本研究尝试改造E2蛋白,以期提高猪瘟E2亚单位疫苗免疫效果。本研究于CSFV C株的E2基因中引入CSFV线性抗原表位基因,设计出了CSFV抗原表位/E2融合蛋白（r E2）,以期能提高E2蛋白的免疫原性。根据杆状病毒载体表达系统（Baculovirus Expression Vector System,BEVS）的密码子优化原则,优化r E2基因序列,人工合成r E2基因。将杆状病毒gp67信号肽基因和r E2基因克隆至转移载体p Fast Bac Dual,获得重组转移载体p FBD-gp67sg-r E2;同时将杆状病毒gp67信号肽基因和CSFV E2基因克隆到转移载体p Fast Bac Dual中,获得重组转移载体p FBD-gp67sg-E2。将重组转移载体p FBD-gp67sg-r E2和p FBD-gp67sg-E2分别转化至含有杆状病毒基因组质粒（Bacmid）的DH10Bac感受态细胞,经细菌内的转座作用,获得重组杆状病毒基因组质粒r Bac-gp67sg-r E2和r Bac-gp67sg-E2。将r Bac-gp67sg-r E2和r Bac-gp67sg-E2分别转染至Sf9细胞,获得重组杆状病毒Ac-gp67sg-r E2和Ac-gp67sg-E2;将重组病毒Ac-gp67sg-r E2和Ac-gp67sg-E2分别感染Sf9细胞,感染后72 h,通过蛋白免疫印迹试验（Western blot,WB）和间接免疫荧光试验（Indirect immunofluorescence assay,IFA）检测感染细胞中融合蛋白r E2的表达情况。Western blot结果显示,感染Ac-gp67sg-r E2的细胞样品在60 k Da处有特异性条带,感染Ac-gp67sg-E2的细�

关 键 词： 猪瘟病毒 抗原表位 蛋白 融合表达

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