导　　师： 章跃陵;王帆

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 汕头大学

摘　　要： 对虾养殖是世界水产养殖的重要组成部分，然而近年来病原性疾病不断威胁着对虾养殖业的健康发展。为了制定有效的防治策略，人们开始更加关注对虾先天免疫防御的分子机制。虽然已有诸多研究报道对虾体内存在多种能响应病原胁迫的应激蛋白，但与鱼类等高等水产养殖动物相比，还大为落后。因此，有必要采取新的策略，对对虾如何响应病原刺激进行深入研究和探索。为此，本研究在优化对虾血浆低丰度蛋白纯化技术的基础上，采用分子生物学、蛋白质组学和免疫学等策略，对白斑综合症病毒（whitespotsyndromevirus，WSSV）刺激后的凡纳滨对虾（Litopenaeusvannamei）血浆低丰度应激蛋白进行了鉴定与免疫学功能分析，所获主要研究结果如下：　　1.对虾血浆低丰度蛋白纯化方法的建立　　首先，采用超速离心纯化对虾血浆，发现高丰度蛋白血蓝蛋白（hemocyanin）可沉降于管底。SDS-PAGE分析显示，与对照组相比，超速离心可去除部分血蓝蛋白。同时，低丰度蛋白可得到较好的富集。　　继而，采用分子筛凝胶层析（SupersoseTM6increase10/300GL,GEhealthcare,USA）技术对上述去除部分血蓝蛋白的血浆进行进一步分离纯化。结果显示，经分子筛凝胶层析去除血蓝蛋白后的血浆，其低丰度蛋白可得到有效的纯化。　　由此说明，超速离心结合分子筛凝胶层析是一种有效的对虾血浆低丰度蛋白纯化方式。　　2.WSSV刺激下血浆低丰度应激蛋白的鉴定　　首先，采用上述建立的血浆低丰度蛋白纯化方法纯化WSSV刺激后对虾血浆样品，并进行iTRAQ（isobarictagsforrelativeandabsolutequantification）分析。结果发现，与对照组相比，感染WSSV后59个蛋白的表达量发生显著性变化，其中，Unigene31697、Unigene36916、Unigene14284、Unigene22593、Unigene11244、CL15、Unigene23065、Unigene6879、CL2720、

关 键 词： 凡纳滨对虾 蛋白纯化 白斑综合症病毒 细胞凋亡 血蓝蛋白