导　　师： 熊犍;张晓琳

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南理工大学

摘　　要： T-2毒素是由镰孢菌属产生的一类单端胞霉烯族化合物,主要存在于霉变的粮食作物和饲料中,含量随环境湿度的增加而增大。T-2毒素可进行生物蓄积作用和通过食物链传递,严重损害人和动物体的安全健康。实验从江浙地区受镰刀菌属霉菌污染严重的土样中筛选出对T-2毒素有高效清除作用的菌株,探究菌株脱毒机理及特性。结果如下:(1)将231份土样分为50组,通过96孔板高通量筛选得到15组阳性混合菌液,从阳性菌液中分离得到52株单菌种。进一步筛选得到A24、B7、B14、B22、B25、B26共6株能够高效清除体系中T-2毒素的单菌种。经16S rDNA鉴定,A24为微歧杆菌、B7为人苍白杆菌、B14为氧化微杆菌、B22为木糖氧化无色杆菌、B25为生癌肠杆菌、B26为暹罗芽孢杆菌。(2)B14和B26生长到稳定期需要14.0h,A24需要16.0h。B26稳定期的OD约为7.60;B14稳定期的OD为4.50。A24、B14、B26分别在15.0h、12.0h和16.0h时清除了体系中95.00%以上的T-2毒素。(3)A24、B14、B26对T-2毒素都有吸附作用,B14细胞吸附T-2毒素能力最强。B26对T-2毒素的脱毒作用主要源于胞内酶,A24和B14主要是胞外酶脱毒。(4)脱毒完成后,B14的HPLC图谱中能明显检测到T-2毒素脱毒产物的存在。BLYR检测菌株B14的T-2毒素脱毒产物的毒性,共培养0.0h样品的IC=0.7747,共培养24h样品的IC=4.4363,脱毒产物的毒性不及T-2毒素本身毒性的1/4000。(5)菌株B14的T-2毒素代谢酶中存在丝氨酸蛋白酶或巯基蛋白酶,以及含有金属离子的酶。菌株B14在24.0-37.0℃,pH=7.0-8.0时上清液对T-2毒素脱毒效果最好。(6)LC-MS分析脱毒产物,菌株B14主要是通过脱乙酰基和脱环氧化作用将T-2毒素代谢成为低毒产物。总共检测到7种代谢产物,其中4种产物并未有过文献报道。(7)以酵母提取物0.50%、胰蛋白胨1.00%、氯化钠1.00%为基础,通过培养基优化可知,蔗糖(2.00%)、大豆蛋白胨(0.50%)、磷酸氢二钾(5

关 键 词： 毒素 生物脱毒 筛选 培养

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