导　　师： 卓侃

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 短体线虫（Pratylenchus spp.）又称根腐线虫，是迁移性内寄生线虫，其寄主范围广泛，与孢囊线虫（Heterodera spp.）、根结线虫（Meloidogyne spp.）并称为三大植物病原线虫。我国南方的甘蔗和玉米等作物常受到玉米短体线虫（Pratylenchuszeae）、拟玉米短体线虫（P. parazeae）和最短尾短体线虫（P. brachyu rus）的侵染，造成严重的经济损失。此外，玉米短体线虫和拟玉米短体线虫常常复合侵染，依靠传统形态学较难区分。因此，本研究建立了快速检测这三种短体线虫的多重PCR、实时荧光定量PCR及环介导等温扩增（LAMP）体系，取得了以下结果：　　1．构建了能同时检测玉米短体线虫、拟玉米短体线虫和最短尾短体线虫的多重PCR体系。该体系包含4对引物，分别是可扩增所有线虫的通用引物 D3A/D3 B，特异扩增玉米短体线虫的引物18S/Praty-R，特异扩增拟玉米短体线虫的引物PpzF/PpzR以及特异扩增最短尾短体线虫的引物PbF2/PbR1。该体系特异性高，灵敏性也较高，能够同时检测三种单条短体线虫的混合DN A样品。　　2.基于 rDNA-ITS区分别设计了玉米短体线虫实时荧光定量 PCR特异性引物（qYF2/qYR2）和探针（qYP)以及拟玉米短体线虫特异性引物（qNF/qNR）和探针(qNP);同时基于mtDNA COI区设计了最短尾短体线虫特异性引物（qBF2/qBR1）和探针（qBP）。利用这些引物和探针建立了可分别检测玉米短体线虫、拟玉米短体线虫和最短尾短体线虫的实时荧光定量 PCR体系。该体系特异性高，扩增玉米短体线虫的Ct值是25.70-29.90;扩增拟玉米短体线虫的Ct值是25.35-25.67;扩增最短尾短体线虫的Ct值是22.19-22.81;灵敏性也高，可检测0.01条线虫DNA模板。　　3.基于mtDNA COI区分别设计了扩增三种短体线虫的环介导等温扩增引物组：包括特异扩增玉米短体线虫外的引物对PZF3/P ZB3和内引物对PZF IP/P ZB

关 键 词： 短体线虫 分子检测 多重 实时荧光定量 环介导等温扩增

领　　域： []