导　　师： 张海涛

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广东医科大学

摘　　要： 目的：　　分析 miR-190对 HepG2细胞增殖和转移的影响，揭示 miR-190靶向抑制PHLPP1(PH domain leucine-rich repeat-containing protein phosphatase1)表达调控HepG2细胞增殖和转移的分子机制。　　方法：　　用慢病毒作为载体，构建稳定过表达miR-190的HepG2细胞株Hmir-G2，空载体对照细胞株为 Cmir-G2，空白对照组为 HepG2细胞。采用定量 RT-PCR技术检测各组细胞中miR-190的表达。用MTT法、克隆形成率实验检测各组细胞增殖。用transwell小室实验检测各组细胞转移。采用Western blot技术检测各组细胞中上皮间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition, EMT)相关蛋白的表达。采用生物信息学方法预测miR-190的靶基因，从这些靶基因中筛选出评分较高的，与细胞增殖和转移相关的基因 PHLPP1。用荧光素酶报告基因实验验证miR-190与靶基因PHLPP1 mRNA结合，确定miR-190与PHLPP1 mRNA的结合位点。采用定量RT-PCR和Western blot技术检测各组细胞中靶基因PHLPP1的表达。采用RNA干扰技术下调PHLPP1的表达后，再检测各组细胞增殖和转移。转染PHLPP1表达质粒提高HepG2细胞PHLPP1的表达水平后，再检测各组细胞增殖和转移。　　将Hmir-G2、Cmir-G2、HepG2这三组细胞分别接种裸鼠皮下，观察裸鼠形成肿瘤能力及大小的情况。将三组肿瘤细胞通过尾静脉注射法接种至裸鼠体内，观察裸鼠形成肿瘤后出现肺转移的情况。　　结果：　　定量 RT-PCR实验结果显示，与 Cmir-G2细胞组比较，Hmir-G2细胞组中miR-190表达增强。MTT、克隆形成率实验的结果显示Hmir-G2细胞组的增殖速度比Cmir-G2细胞组快。Transwell迁移和侵袭实验结果显示，Hmir-G2细胞组的迁移和侵袭能力较Cmir-G2细胞组强。Western blot实验结果显示，与Cmir-G2 细胞组比较，Hmir-G2细胞组的EMT相关蛋白TCF8/ZEB1和Snail的表达水平升高。荧光素酶报告基因实验结果显示，miR-190与 PHLPP1 mR

关 键 词： 靶向抑制 细胞增殖 肿瘤转移 分子机制

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