导　　师： 方颖

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南理工大学

摘　　要： 血小板黏附到受损的血管壁上,是止血与血栓形成中的重要过程。血管性血友病因子（Von Willebrand Factor,VWF）与血小板受体GPIbα间的相互作用,介导着血小板的附着黏附以及滚动黏附过程,在血小板初始黏附阶段起着非常重要的作用。VWF的活性与其分子大小有关,分子量越大,其活性越强。血管性血友病因子水解蛋白酶ADAMTS13（A disintegrin and metalloprotease with a thrombospondin type 1 motifs 13）通过酶切VWF-A2结构域中心的Tyr1605-Met1606肽键,对VWF的大小进行调节,从而调节VWF的活性。目前有研究表明ADAMTS13存在低亲和力的闭合构象和高亲和力的打开构象;ADAMTS13中的spacer结构域中5个特定的位点发生突变（R568K/F592Y/R660K/Y661F/Y665F）,称之为功能增强型突变体（GOF）,其酶切活性相较WT增加约2.5倍;此外,低pH可以增强ADAMTS13的活性,Ca2+,Mg2+,Zn2+等二价金属离子亦可调节ADAMTS13酶切VWF-A2的活性。ADAMTS13在上述各种条件下的酶切活性的变化是否是与其自身的构象发生变化有关?ADAMTS13分子是否存在多种构象,低pH是否诱导ADAMTS13构象发生改变,以及二价金属离子是否会影响ADAMTS13构象?本研究利用原子力显微镜分别对不同条件下WT-ADAMTS13及GOF-ADAMTS13进行形态学扫描。数据显示,不同条件下,WT-ADAMTS13和GOF-ADAMTS13的体积（Volume）、投影面积（Projected Area）、最长径（Maximum length）相比,区别并不明显。但是,WT-ADAMTS13蛋白颗粒的纵横比值（Aspect Ratio）显著性地小于GOF-ADAMTS13的纵横比。对纵横比数据进行柱状图分布并进行高斯函数拟合,WT-ADAMTS13的纵横比呈双峰分布,GOF-ADAMTS13的纵横比呈三峰分布。我们将每个峰定义为不同的类型（state I,state II,state III）,我们提出state I是“封闭”的构象,state III是“开放”的构象,state II是中间态构象。数据显示,在pH 6和pH 7.5条件下,WT-ADAMTS13采用两种不同的构象状态�

关 键 词： 二价金属离子 构象

领　　域： []