导　　师： 黄振烈

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 广东药科大学

摘　　要： 研究目的1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)是一种有机溶剂,因具有性能好、价格低等特点使其在工业上应用广泛。1,2-DCE易经多种途径进入人体,职业接触主要经呼吸道吸入而发生中毒事故。现有研究主要集中在1,2-DCE致神经系统、肝肾系统、呼吸系统的毒性作用,而目前关于1,2-DCE暴露致雄性生殖毒性研究甚少,中毒机制不详。为了揭示1,2-DCE诱导的雄性生殖毒性并阐明其潜在的毒性机制,本研究目的通过吸入暴露建立动物模型来模拟1,2-DCE职业暴露,探索1,2-DCE致雄性生殖毒性及其致病机制。研究方法1.构建1,2-DCE亚急性雄性生殖毒性动物模型采用全身动式吸入染毒方式进行1,2-DCE暴露实验,选用雄性NIH小鼠,SPF级,7周龄,200只,将其按体质量随机分为4组,分别给予0、100、350、700 mg/m~3的1,2-DCE染毒剂量,6 h/d,每周连续染毒7 d。动物模型主要分3个部分,第1部分80只小鼠用于1,2-DCE的血液动力学试验,检测小鼠的血液、尿液内暴露浓度;第2部分60只小鼠用于1周暴露实验;第3部分60只小鼠用于4周暴露实验。在实验期间,严格进行质量控制,每天监测染毒柜内温度、湿度、氧气、二氧化碳、氨气和气溶胶粒径。2.检测1,2-DCE亚急性雄性生殖毒性染毒结束后,分析各剂量组雄性NIH小鼠的体重变化,称量并计算睾丸脏器系数;对睾丸、附睾组织进行病理学检查;检测附睾内精子的常规参数、畸型率和精子细胞损伤情况;采用ELISA法对小鼠血浆和睾丸组织匀浆液中的睾酮合成相关激素水平进行检测分析。3.1,2-DCE致雄性生殖毒性分子机制研究采用qRT-PCR与蛋白质印迹分别检测睾酮合成关键酶、CREM/CREB信号通路分子和细胞凋亡信号通路分子的基因和蛋白质表达水平。采用TUNEL荧光染色法定量分析睾丸生精细胞凋亡水平,采用TUNEL DAB染色法定性分析睾丸凋亡的细胞和阶段特异性。研究结果1.1,2-DCE亚急性雄性

关 键 词： 二氯乙烷 细胞凋亡 信号通路 生殖毒性