导　　师： Melitta Schachner;赵炜疆

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 汕头大学

摘　　要： 目的:　　透明质酸(Hyaluronicacid，HA)是阴离子糖胺聚糖，广泛分布于结缔组织、上皮组织和神经组织，是唯一的非硫酸化的，在质膜中而不是在高尔基体中合成的糖胺聚糖，分子量常达到数百万。透明质酸是细胞外基质的主要成分之一，对细胞增殖和迁移有重要作用，但目前针对HA在神经系统中的作用研究和报道较少。由于HA提纯和合成成本高昂，且由于血脑屏障的存在不利于其在神经系统疾病中的研究和应用。因此本课题旨在利用噬菌体展示技术筛选透明质酸模拟肽，获得在结构和功能上可以替代HA的十二肽，以进一步研究其在神经再生中的作用。　　方法:　　1.利用M13噬菌体十二肽展示肽库以透明质酸抗体为包被底物筛选透明质酸模拟肽。　　2.利用ELISA技术对淘选得到的噬菌体进行亲和性检测，挑选阳性噬菌体提取DNA送测序并合成HA模拟肽及对应的逆序肽和随机肽。　　3.利用ELISA技术对合成的HA模拟肽进行亲和性鉴定。　　4.原代培养7天新生小鼠小脑颗粒细胞，随机给予溶剂对照，HA阳性对照，模拟肽，逆序肽和随机肽，在形态学水平观察其对小脑颗粒细胞生长的影响，利用蛋白质免疫印迹（WB）检测其对相关再生和凋亡等信号通路的影响。　　5.建立小鼠脊髓损伤模型，尾静脉注射给药，连续给药7天，免疫荧光检测模拟肽对损伤脊髓神经再生的影响。　　结果:　　1.噬菌体展示淘选过程中，四轮洗脱后噬菌体滴度均大于1x103pfu/μL，同时两轮扩增后噬菌体滴度均大于1×1010pfu/μL，满足实验要求。　　2.经过噬菌体ELISA检测，得到至少50个阳性噬菌体，测序后挑选最优的两条序列合成模拟肽和相应的逆序肽与随机肽。　　3.ELISA实验证实合成的模拟肽对HA有较高模拟性。　　4.原代培养小鼠小脑颗粒细胞的形态学实验证明，模拟肽�

关 键 词： 透明质酸 噬菌体展示 模拟肽 神经再生 脊髓损伤 蛋白质