导　　师： 薛平

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 广州医科大学

摘　　要： 背景：　　胆管癌（Cholangiocarcinoma）是一种恶性程度极高的肿瘤，其预后较差，容易复发和转移，5年生存率低，新的胆管癌治疗手段成为世界研究的热点。免疫治疗成为继手术、化疗和放疗后的第四种肿瘤治疗模式，通过增强免疫细胞活性，从而达到识别、杀伤肿瘤细胞的目的。但是，由于肿瘤细胞的异质性及多种免疫逃避机制，特异性免疫细胞失活，效应免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤作用减弱。因此在临床实践中，无抗原刺激的DC-CIK细胞（Dendritic cell，DC）（Cytokine-induced killer，CIK）对肿瘤细胞的抑制和杀伤效果不理想。近年来，有研究显示，利用抗原致敏DC可显著减低肿瘤细胞免疫逃逸，有助于提高抑瘤效果，Sievers等利用肾癌特异性抗原致敏DC提高抑瘤效果。但现阶段未发现关于临床上胆管癌特异性抗原致敏DC-CIK免疫回输治疗的临床研究。　　综上，本研究提出如下科学问题：利用胆管癌全抗原致敏DC-CIK能否增强对胆管癌细胞的抑瘤效应？　　目的：　　通过胆管癌全抗原致敏DC-CIK后，观察DC-CIK细胞的形态改变及增殖情况，探讨抗原致敏DC-CIK细胞的抗肿瘤活性。为临床上应用胆管癌特异性抗原致敏DC-CIK免疫治疗提供初步研究依据。　　方法：　　分离PBMC后取贴壁细胞作为前体DC，悬浮细胞用于CIK培养;经rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-α诱导DC成熟;成熟DC中加入RBE肿瘤抗原进行致敏，作为抗原致敏DC组;经rhIL-2、IL-1β诱导CIK成熟;按DC∶CIK=1∶10的比例进行混合培养;流式细胞术检测DC表面标记（CD86，CD83，CD40，HLA-DR，CD1α，CD80）;流式细胞术检测CIK、未致敏DC-CIK、致敏DC-CIK共培养细胞表面标记（CD3、CD8、CD56）;采用萤火虫萤光素酶法检测CIK、未致敏DC-CIK、致敏DC-CIK抑瘤率;采用酶联免疫吸附剂测定（Elisa）法对细胞因子IL-12、IFN-γ的表达水平进行检�

关 键 词： 胆管癌 树突状细胞 细胞因子诱导的杀伤细胞 体外抑瘤 活性

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