导　　师： 莫志贤;刘俊珊

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 肝细胞性肝癌(HCC)在全球癌症相关死亡的最常见原因中排名第三。到目前为止，HCC的治疗药物有限。中药是寻找和设计高效低毒的HCC治疗药物的重要来源。苦豆碱(ALO)是提取自中药苦豆子（Sophora alopecuroides L.）的喹诺里西丁类生物碱，以往研究表明，ALO在多种肿瘤细胞上表现出抗肿瘤作用。然而，ALO对HCC的作用很少被研究，其潜在的机制仍然未知。　　目的：　　本研究旨在评价ALO的抗HCC活性并探索其潜在机制，为ALO进一步开发成为HCC治疗药物提供科学依据。　　方法：　　采用MTT法和细胞克隆实验检测ALO对人肝癌细胞Hep3B和Huh7的增殖抑制作用。采用Hoechst33258染色观察ALO处理后细胞的形态变化。采用流式细胞术分析细胞凋亡、线粒体膜电位的变化和细胞周期分布。采用蛋白免疫印迹实验检测与凋亡和细胞周期阻滞相关的蛋白的表达水平，以及PI3K/Akt信号通路中的关键蛋白质。采用小干扰RNA(siRNA)转染技术研究Akt在ALO诱导的细胞凋亡和细胞周期阻滞中的作用。建立斑马鱼肿瘤模型来评价ALO的体内抗HCC作用。　　结果：　　ALO抑制Hep3B和Huh7细胞的增殖。ALO诱导HCC细胞凋亡，并伴随线粒体电位的丧失，细胞色素C释放到胞质，以及caspase-9，caspase-3和PARP切割形式的增加。此外，ALO诱导G2/M期细胞周期阻滞并下调cdc25C，cdc2和cyclinB1的表达水平。ALO通过降低p110α，p85，Akt和p-Akt(Ser473)的表达水平来抑制PI3K/Akt信号通路的激活。进一步的研究表明siRNA抑制Akt的表达增强了ALO诱导的HCC细胞凋亡和G2/M期细胞周期阻滞。体内实验发现，ALO抑制了Huh7细胞在斑马鱼体内的生长。　　结论：　　ALO通过抑制PI3K/Akt信号通路诱导HCC细胞凋亡和G2/M期细胞周期阻滞。该研究为ALO作为潜在的抗HCC药物提供了基本实验依据。

关 键 词： 肝细胞性肝癌 苦豆碱 细胞凋亡 细胞周期阻滞 调控机制

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