导　　师： 李奇

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 脊髓损伤区域抑制性微环境是阻碍轴突再生与康复的重要因素。虽然神经干细胞移植取得了不错的效果，然而外源性细胞存在伦理、细胞来源、免疫排斥、致瘤性等问题制约了临床转化。如何调控内源性神经干细胞已成为学者关注的焦点。　　研究证实microRNA在中枢神经系统广泛表达，发挥调控神经干细胞的作用。研究者认为人工合成的miRNAs可导入细胞发挥相应的调控作用。然而经过人工合成的miRNA在脊髓损伤区域容易被酶解，且带负电的miRNA很难跨膜运输。因此，需要构建一个载体避免miRNA被降解且可跨膜转运至细胞内调控内源性神经干细胞。　　目的：　　本课题拟在前期研究的基础上制备miR-29纳米微粒载体，结合自组装多肽纳米支架植入大鼠脊髓损伤区域，探索其调控内源性神经干细胞的作用，为自组装纳米多肽microRNA缓释体系的研发与临床转化提供新的思路与研究基础。　　方法：　　1.制作大鼠脊髓损伤模型;各阶段BBB评分与组织病理;免疫荧光检测神经干细胞增殖分化;RT-PCR和WB检测miR-29和Nestin基因与蛋白的表达量。　　2.采用“氧化还原法”对纳米金颗粒进行表面修饰，制备PEG-SH修饰的GNPs;紫外分光光度计检测吸收峰值;透射电镜检测粒径分布;Zeta电位检测表面电势;人工合成的microRNA和PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒在各时间段进行SDS-PAGE凝胶电泳;CCK-8法检测人工合成的miR-29，PEG-SH GNPs以及PEG-SH GNPs miR-29纳米微粒对神经干细胞活性、增殖的影响。　　3.周相法合成多肽，调节肽的PH至自组装临界点，形成凝胶，扫描电镜和透射电镜观察。将神经干细胞接种于支架材料以及预涂多聚赖氨酸的玻片上，滴加DMEM/F12及1％的胎牛血清置入细胞培养板中培养，免疫荧光检测分化。构建PEG-SH GNPs/miR-29复合纳米微粒并将其混悬液缓慢添加至支架。Cy5

关 键 词： 脊髓损伤 纳米支架 自组装多肽 非编码单链 缓释体系 内源性神经干细胞 细胞再生

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