导　　师： 曹庸;蔡玮红

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 酪蛋白磷酸肽（Casein Phosphopeptides，简称CPP）的结构特性，决定了其种类的多样性。不同的公司使用的酶以及酶解条件不同，最终获得的CPP序列会存在一定差别，目前尚无统一的定性定量方法评价及检测CPP。为了解决这个问题，对酪蛋白进行了酶解，对其酶解产物进行了定性分析，并分离出持钙活性肽，对其中的主要成分进行了分离及序列鉴定，筛选了含CPP样品的前处理方式，同时建立了CPP的高效液相色谱检测方法，并进行了应用。主要研究内容及结果如下：　　（1）从酪蛋白酶解物中筛选出了CPP，分离出了5个单体组分，并鉴定了活性单体的结构序列，其中磷酸丝氨酸个数最多的单体序列为：RELEELNVPGEIVESLSS SEES ITR。　　（2）从不同样品前处理方式中选择了相对合适的液态奶、奶粉及钙片样品的前处理方式：牛奶采用三氯乙酸（Trichloroacetic Acid，简称TCA）法结合热变性法、酸奶采用先稀释调节pH再用TCA法、奶粉采用等电点法、钙片采用溶解超声提取法，检测结果显示分析效果较好。　　（3）优选了色谱柱、流动相、柱温及流速等HPLC分析条件，筛选出的分析CPP条件为：色谱柱采用月旭的C18柱、流动相为乙腈添加1‰三氟乙酸（Trifluoroacetic Ac id，简称TFA）和水添加1‰TFA、柱温35℃、二元高压梯度洗脱模式、总流速0.8 mL/min、紫外检测波长215 nm。　　（4）建立了奶粉中CPP的HPLC定量检测方法，其梯度洗脱条件为：10%～20%乙腈（1‰TFA）洗脱15 min，20%～26%乙腈（1‰TFA）洗脱30 min，进样量20μL。该方法的检测限为15.34 mg/k g，定量限为51.14 mg/k g。在此条件下，CPP能够与杂质等干扰成分达到较好的分离效果，检测到奶粉样品中CPP的加标回收率在97.59%～100.00%之间，接近真实添加量。同时测定了不同厂家的奶粉样品，检测结果与厂家标称含量接近，�

关 键 词： 酸奶 酪蛋白磷酸肽 酶解产物 结构序列 超声提取

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