导　　师： 蔡道章

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 背景：　　创伤、生理性和病理性骨吸收异常都可能会导致骨缺损，严重威胁着全球人们的生活与健康，而目前对于骨缺损的治疗仍旧面临着巨大的挑战。在针对骨缺损的治疗研究中，已经有大量的研究发现microRNA-17～92对成骨细胞增殖、分化等生物体功能具有非常重要的调控作用。小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)能够特异性表达成骨相关转录因子Runx-2和碱性磷酸酶等早期成骨分化表型标志物，已经被广泛应用于成骨分化的研究中。但在MC3T3-E1细胞成骨分化的研究中，关于miR-92a-1-5p是否能够通过特定的信号通路调控该细胞发生成骨分化，和发挥调控作用的分子机制是什么，目前还没有相关报道提出。　　目的：　　探究miR-92a-1-5p是否通过Wnt/β-catenin信号通路调控MC3T3-E1细胞成骨分化，并阐述miR-92a-1-5p发挥调控作用的分子机制。　　方法：　　1、miR-92a-1-5p在BMP-2诱导MC3T3-E1成骨分化中的影响　　(1)使用BMP-2诱导MC3T3-E1细胞进行成骨分化，通过qRT-PCR和Western Blot检测诱导前后miR-92a-1-5p、ALP、Runx-2、OSX的表达水平。　　(2)采用MTT法检测诱导前后MC3T3-E1细胞的增殖情况。　　(3)在MC3T3-E1细胞中构建miR-92a-1-5p过表达或低表达模型，采用qRT-PCR检测过表达或干扰效率，以及ALP、Runx-2，OSX的表达情况，采用碱性磷酸酶试剂盒检测ALP的活性。　　(4)在MC3T3-E1细胞中转染miR-92a-1-5p mimics或inhibitor，再诱导MC3T3-E1细胞成骨分化7天，通过茜素红S法染色检测成骨分化能力。　　2、miR-92a-1-5p调控β-catenin抑制MC3T3-E1细胞成骨分化的作用机制研究　　(1)结合文献调研、生物信息学和在线数据库分析预测miR-92a-1-5p的下游靶基因。　　(2)在MC3T3-E1细胞中构建miR-92a-1-5p过表达或低表达模型，采用qRT-PCR、Western Blot检测β-catenin的表达水平。　　(3)在MC3T3-E1细胞中转染miR-92a-1-5p

关 键 词： 成骨细胞 细胞分化 非编码小分子核糖核酸 基因表达 信号通路 调控机制