导　　师： 廖彩仙

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 背景肝细胞癌(肝癌)在全球恶性肿瘤中发病率居第五位,死亡率居第三位。由于早期无特异表现、治疗后易复发,肝癌病人整体预后较差,是威胁人类健康的重大医疗问题。因此,寻找用于精准早期诊断的的生物标志物和有效的治疗靶点是肝癌研究的重点。近年来发现miR-217已被证实在胃癌、前列腺癌等恶性肿瘤中异常表达,但是在肝癌中miR-217的作用机制仍不明确。异黏蛋白(MTDH)是一种含582个氨基酸的单跨膜蛋白,其在多种肿瘤中均有异常高表达,且其表达水平与肿瘤的进展正相关。MTDH基因的表达还与癌症进展的阶段、分期、以及预后相关。MTDH基因通过调控癌症过程中的多个信号通路参与癌症进程,因此MTDH是一个潜在的治疗靶点。目前对于MTDH在肝癌中的表达调控机制研究还比较少。miRNA能通过间接或者直接调控MTDH的的表达,在结直肠癌中是miRNA间接调控MTDH,在乳腺癌、人头颈部鳞状细胞癌中都是miRNA直接调控MTDH的实例,然而对于miR-217与MTDH的关系尚不明确。我们通过对患者肝癌组织和HepG2细胞的研究,探索miRNA-217介导MTDH在肝癌发生发展中的相关研究及作用机制。目的1.检测miR-217和MTDH在肝癌和癌旁组织中的差异性表达,探讨其相关性;2.验证miR-217与MTDH基因的靶向作用关系;3.检测miR-217对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学行为的影响。方法1.自南方医科大学南方医院病理科收集20例肝癌和癌旁组织,分别采用实时荧光定量PCR及Western Blot检测其中miR-217、MTDH mRNA和蛋白水平的表达;2.通过TargetScan预测miR-217与MTDH的结合位点,分别构建MTDH基因3’-UTR区的野生型和突变型荧光素酶报告质粒,与miR-217 mimics共转染HepG2细胞,检测其荧光表达变化。在HepG2细胞中过表达miR-217,通过实时荧光定量PCR、Western Blot及免疫荧光分别检测细胞中MTDH的mRNA和蛋白的表达变化,验证miR-217对MTDH的靶向作用;3.在HepG2细胞中过表达miR-217,通过MTT、流式细胞术、Transwell实验检测miR-217对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学特性的影响。结果1.在20例肝癌和癌旁组织中,miR-217在肝癌中的表达量较癌旁组织明显降低(40%),而MTDH mRNA在肝癌中较癌旁组织表达高近一倍,MTDH蛋白水平的表达mRNA水平一致。2.通过转染miR-217 mimics,成功在HepG2细胞中过表达miR-217,miR-217显著抑制野生型MTDH 3’-UTR载体的荧光强度,对突变型MTDH 3’-UTR载体无明显作用。过表达miR-217明显抑制HepG2细胞中MTDH mRNA和蛋白的表达,证明了 miR-217直接靶向于MTDH基因的3’-UTR区,从而抑制MTDH基因的表达。3.在HepG2细胞中过表达miR-217,通过CCK-8实验和流式细胞周期检测发现:较之空白及阴性对照组,过表达miR-217能显著抑制HepG2细胞的增殖,并增加处于G1期、减少S期的HepG2细胞;同时,过表达miR-217,促进HepG2细胞的凋亡;Transwell实验结果表明,过表达miR-217后,转移到下室中的细胞明显减少,证明miR-217显著抑制HepG2细胞的迁移和侵袭。结论1.在肝癌组织中miR-217表达下调,MTDH表达上调。2.miR-217靶向作用于MTDH,抑制其表达。3.miR-217能够显著抑制HepG2细胞的增殖、侵袭和迁移并促进HepG2细胞的凋亡。更多还原

关 键 词： [6957639]肝细胞癌 miR-217 迁移和侵袭 [1349578]增殖 细胞凋亡

分 类 号： [R735.7]

领　　域： []