导　　师： 区永祥;万小荣;李如玉

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 仲恺农业工程学院

摘　　要： 植物基因工程育种是进行小麦遗传改良的重要手段之一,但是传统遗传转化方法存在的典型问题是外源基因的随机插入和多拷贝。重组酶介导的位点特异性重组系统可使基因定点插入并获得单拷贝,且能够实现多基因持续定点叠加。因此,该系统能够快速获得纯合子并将实验室的优良性状渗入当地栽培种中,大大加速了育种进程。其中第一个位点(起始目标系)的建立是此系统的关键环节,但该环节需要利用传统的遗传转化法。而小麦转化的普遍难题是转化效率低、因品种而异、对实验人员组培经验性要求高。本研究旨在本实验室建立小麦的农杆菌转化系统,并应用到位点特异性重组系统起始目标系的建立中。首先,以春小麦品种Fielder(Triticum aestivum L,cv.Fielder)为材料,用含有报告基因DsRed和筛选基因Bar的EHA105农杆菌侵染小麦幼胚并诱导愈伤,经过PPT抗性筛选后,将抗性愈伤再生成植株。整个过程3个月左右能收获有DsRed表达且PCR阳性植株。随后,利用上述转化体系转入含有重组酶识别位点的起始目标系质粒pZH114,侵染了3000多个幼胚并筛选再生,经PCR检测确认获得了39个转化事件的93个转基因植株,其中左右边界都完整(重组位点完整)的转化事件有32个,植株有68个。因此,本研究在本实验室成功地建立了小麦农杆菌转化体系,并获得了小麦的起始目标候选系,从而为小麦位点特异性重组系统的建立打下了很好的基础。

关 键 词： 定点叠加 农杆菌 遗传转化 位点特异性重组酶

领　　域： []