导　　师： Min Chen

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 汕头大学

摘　　要： 研究背景与目的：在乳腺癌患者中ER阳性的患者约70%-80%，其主要治疗方式是以他莫昔芬为主的内分泌治疗，据临床统计数据术后持续5年的他莫昔芬治疗减少了患者51%的复发率和28%的死亡率，但是长期使用他莫昔芬后会出现耐药。他莫昔芬耐受是乳腺癌内分泌治疗出现复发难治的重要原因。有文献报道miR-221/222能够通过Cip/Kip家族(p21,p27,p57),ER-α,TIMP3,FOXO3A,PUMA和PTEN等靶标基因影响他莫昔芬耐药，miR-221/222在乳腺癌他莫昔芬耐药细胞中过表达，抑制miR-221/222表达后，乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感性得到恢复。为了实现miRNA功能的丧失，miRNA海绵技术被开发出来，利用质粒或病毒载体来实现细胞内串联排列、突出的与miRNA种子序列互补的DNA高水平表达，从而对miRNA功能进行短暂或长期的抑制。利用miRNA家族成员共享一个共同的种子序列的优势，这项技术在敲除一个miRNA家族的表达方面尤为有用，为同时用单一抑制剂抑制多个感兴趣的miRNA提供了强有力的手段。因此，本课题拟设计miRNA海绵体吸附miR-221/222使其失功能，为了实现临床转化，将其构建到端粒酶逆转录酶启动子的质粒中，使其在癌细胞中特异性的表达，进而恢复乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感性。　　材料与方法：使用高浓度他莫昔芬持续冲击诱导法建立乳腺癌他莫昔芬耐药的细胞模型：MCF-7-TamR，通过CCK8法检测MCF-7-TamR的IC50对其进行鉴定，并观察MCF-7-TamR的形态学变化以及通过荧光定量PCR和WesternBlot检测相关蛋白标志物的变化。设计合成miR-221/222海绵，通过双酶切、琼脂糖凝胶电泳、DNA胶回收、连接、质粒大提等将海绵克隆到带有端粒酶逆转录酶启动子的质粒中，用生物素标记的RNApull-down技术验证miR-221/222海绵与miR-221/222的结合，利用CCK8细胞活性检测、qRT-PCR、westernblot、transwell实验和3D

关 键 词： 乳腺癌 海绵体 基因 他莫昔芬耐药 端粒酶逆转录酶启动子

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