导　　师： 刘士德;张建华

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 深圳大学

摘　　要： 纳米材料广泛应用于医药、化工、能源、日常生活用品等各个领域,纳米材料产品有防晒霜、载药剂、涂料、食品添加剂等。纳米材料颗粒可流入空气、水、土壤环境中,人们对纳米材料的使用使得纳米材料易于进入人体。有研究表明纳米材料可引起空气粒度污染、土壤重金属污染、水体有机质污染,也可引起机体氧化应激、炎症反应、DNA损伤、细胞凋亡等不良反应。纳米材料的毒性评估尚未有统一的标准,纳米材料的毒性评估体系有个体水平、器官水平、细胞水平、蛋白水平、基因水平等,本课题从细胞水平与基因水平研究几种纳米材料的细胞毒性,期望找到鉴定纳米材料细胞毒性的关键基因。本课题用原子力显微镜检测nm-TiO、nm-CuTiO、nm-Betaine、nm-HA四种纳米材料的粒径,以不同浓度的nm-TiO、nm-CuTiO、nm-Betaine、nm-HA胁迫L929细胞作为实验组,以不同浓度过氧化氢处理L929细胞作为阳性对照组。倒置显微镜观察细胞的形态变化,MTT法检测了L929细胞三天的细胞活力变化。endosome的标志蛋白Rab5的免疫荧光抗体标记endosome,通过荧光显微镜检测了四种纳米材料胁迫L929细胞48小时后的荧光分布与荧光强度。DCFH-DA荧光探针标记细胞的ROS,通过荧光显微镜与流式细胞术检测细胞的ROS水平。重组质粒COX4-PEGFP-N2转染L929细胞,G418筛选稳定遗传的细胞株后,以荧光显微镜检测各组细胞的线粒体形态的变化与细胞色素C的分布。免疫荧光抗体标记转录因子NF-Кb,通过荧光显微镜观察NF-Кb的荧光分布与荧光强度。ELISA试剂盒检测各组细胞炎症因子TNF-α的浓度变化。DNA损伤试剂盒检测DNA的氧化损伤程度。QPCR验证各相关基因的表达水平。本课题以nm-TiO、nm-CuTiO、nm-Betaine胁迫多头绒泡菌后测转录组,通过转录组数据分析找到鉴定纳米材料细胞毒性的关键基因,并通过QPCR进行验证,为进

关 键 词： 细胞 细胞色素 基因

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