导　　师： 黄瑛

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 深圳大学

摘　　要： 随着化石能源的枯竭和环境污染的加剧,新一代微藻生物柴油技术受到了广泛关注。利用基因工程手段调控微藻油脂关键基因,增加微藻油脂含量的研究已成为降低微藻柴油成本的重要途径。到目前为止,本实验室利用模式微藻——莱茵衣藻,进行油脂代谢调控的研究也取得了重要进展:一方面我们发现在莱茵衣藻中过表达DOF转录因子,能显著增加其胞内的油脂含量;另一方面,我们也发现在莱茵衣藻内分别沉默长链酰基辅酶A合成酶的两个基因ACS1和ACS2也能增加胞内油脂含量,并且能在一定程度上实现微藻的脂肪酸胞外分泌。但是上述基因之间是否存在相互关系?能否对这些基因进行同时调控?基于这些问题,我们开展了本研究。本论文采用了连续多次转化的方式构建出ACS1和ACS2共沉默的工程藻Mq12,在莱茵衣藻中实现了多基因的共沉默。与单基因沉默藻株相比,共沉默工程藻的胞内油脂含量有明显提高。在此基础上,本论文也进一步构建了沉默ACS2同时过表达DOF的工程藻株Mc7。与单基因调控藻株相比,工程藻的胞内油脂含量也有显著增加,并且其胞外脂肪酸的分泌量也有明显提升。证实了多基因共调控策略在微藻产油调控中的重要意义。本论文的具体研究结果如下:1.构建了ACS2基因的RNA干涉载体pMaa7IR/ACS2IR。该载体在莱茵衣藻中表现出巴龙霉素抗性,含有来源于ACS2的421 bp片段组成的发卡结构,该发卡结构受莱茵衣藻RBCS2启动子调控,可高效抑制衣藻内源ACS2基因的表达量。2.采用连续转化的方法,将pMaa7IR/ACS2IR转入已沉默了ACS1基因的工程藻,经BODIPY染色筛选获得ACS2和ACS1基因高效共沉默的工程藻株Mq12。荧光定量PCR检测显示,工程藻Mq12中ACS1基因的表达量下调了63%,ACS2基因表达量下调了82%。微藻胞内甘油酯含量测定结果表明,共沉默藻株Mq12的胞内甘油酯含量分别比野�

关 键 词： 莱茵衣藻 脂肪酸分泌 酰基辅酶 合成酶 转录因子 多基因调控

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