导　　师： 宁章勇

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 干扰素诱导跨膜蛋白3(Interferon-induced transmembrane protein3, IFITM3)是一种重要的干扰素刺激基因，在机体抗病毒和抗炎等方面发挥重要作用，能抑制多种病毒感染，包括囊膜病毒和非囊膜病毒，如IAV、HIV-1和呼肠弧病毒等。然而这些病毒几乎都是RN A病毒，对DN A病毒抑制作用却少有报道。而且目前为止还未有山羊IFITM3基因组织特异性表达和分布数据，这严重妨碍了山羊病毒性疾病发生机制的研究。因此本研究对海南黑山羊IFITM3基因进行了克隆和序列分析，利用原核表达系统表达IFITM3蛋白并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，通过RT-qPCR和免疫组织化学研究海南黑山羊各个组织中IFITM3基因mRNA相对表达情况和IFITM3蛋白分布情况，构建IFITM3过表达和抑制表达OFTu细胞模型，研究了IFITM3蛋白在ORFV感染中的作用。研究内容如下：　　海南黑山羊IFITM3基因的克隆及序列分析　　以海南黑山羊肝脏总RNA为模板，使用RT-PCR扩增海南黑山羊IFITM3基因，将基因序列提交到GenBank，获得登录号KM236557。运用生物分析软件对海南黑山羊 IFITM3序列进行了分析，结果显示，所克隆的山羊 IFITM3基因表现出种属内保守性和种属间差异性，编码147个氨基酸，蛋白分子量约为15.6 kDa，存在两个潜在跨膜区，不含信号肽。　　海南黑山羊IFITM3蛋白原核表达与多抗制备　　以pMD18-T-IFITM3质粒为模板，设计特异性引物，扩增含EcoR I和Xho I酶切位点的基因片段，构建pET-32a(+)-IFITM3原核表达质粒。将构建成功的表达质粒转化至表达细菌BL21(DE3)，经 IPTG诱导，SDS-PAGE和Western-Blot分析，结果显示IFITM3蛋白成功诱导表达。将纯化后的蛋白与佐剂混合免疫新西兰大白兔，制备兔抗山羊IFITM3多克隆抗体。间接ELISA法和Western blot检测，结果表明制备的多克隆抗体效价高特异性好。　　海南黑山羊IFITM3基�

关 键 词： 羊口疮病毒 干扰素诱导 跨膜蛋白 黑山羊

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