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含锶硫酸钙材料促进间充质干细胞成骨分化、改善大鼠胫骨缺损修复机制研究

导  师: 余斌

授予学位: 博士

作  者: ();

机构地区: 南方医科大学

摘  要: 骨移植术是通过手术方式植入材料来增加骨再生的最常见的外科手术之一,是仅次于输血的组织移植术,普遍用于因肿瘤外科治疗等因素导致的骨缺损。全球范围内,每年有超过两百万的骨移植术被实施。因此,研究骨缺损后重建和恢复意义重大。  研究证明,锶可促进成骨细胞分化,抑制破骨细胞形成和吸收,同时还有助于体外胶原合成。因此,含锶骨替代材料有可能在预期位置刺激骨生长。本研究采用共沉淀法和水热法制备了新型的含锶硫酸钙,并建立了SD大鼠胫骨骨缺损模型。此外,证实了不同含量的含锶硫酸钙对骨修复的影响和作用机制。  目的:  1.体外探讨新型骨替代材料含锶α-半水硫酸钙浸提液对骨髓间充质干细胞(BMSC)的影响;2.构建SD大鼠胫骨临界性骨缺损模型,并进行含锶α-半水硫酸钙材料移植入,检测对骨生成的影响;3.收集缺损模型后含锶α-半水硫酸钙材料治疗后的胫骨,行病理等基础检测,检测对骨生成及信号通路的影响。  方法:  1.培养骨髓间充质干细胞,0%,5%,10%含锶硫酸钙浸提液处理1、3、7后天,MTT法和软琼脂克隆法检测BMSCs增殖能力;AnnexinⅤ/PI双染检测细胞凋亡能力;Transwells实验检测BMSCs侵袭能力;茜素红染色检测细胞成骨分化能力。机制上,qRT-PCR实验检测Runx2、Osterix、ALP、OCN和BSP表达水平;western blot实验检测TGF-β、Smad2/3和β-catenin表达水平。  2.全身麻醉采用肌肉注射3%戊巴比妥钠,体重30mg/kg。切开胫骨近端皮肤,逐层深入,随后用骨膜剥离子剥离骨膜,露出胫骨干。采用尖端0.8mm钻头从单侧胫骨的内侧皮质关节下制造骨缺损(长5mm,宽3mm),用生理盐水冲洗缺损和髓内管,清除残余骨和骨髓。建立骨缺损动物模型。并将SD大鼠分为4组:骨缺损组;硫酸钙组;5%含锶α-半水硫酸钙组;10�

关 键 词: 胫骨缺损 骨移植术 含锶硫酸钙材料 间充质干细胞 成骨分化 修复机制

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