导　　师： 洪岸;王晓刚

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 目的明确长链非编码RNA lnc-mg促进成肌分化的生物学效应;探讨lnc-mg作为ce RNA促进成肌分化的分子机制。方法1、构建lnc-mg敲低和过表达载体,用lipofectamine3000将lnc-mg敲低和过表达载体转染成肌细胞。通过免疫荧光染色方法观察成肌细胞肌管形成情况,q PCR方法检测成肌marker基因Myod和Myog的表达情况。2、通过基因芯片方法筛选受lnc-mg调控的mi RNA。3、通过双荧光素报告实验检测lnc-mg与mi R-125b的结合。4、通过生物素标记的核酸捕获实验、Ago2免疫沉淀实验检测内源性lnc-mg和mi R-125b结合。5、将lnc-mg敲低和过表达载体转染成肌细胞后,通过Western Blot、ELISA检测mi R-125b靶基因Igf2的表达情况。6、通过Ago2免疫共沉淀实验、生物素标记的核酸捕获实验和双荧光素报告实验验证lnc-mg可以竞争mi R-125b结合Igf2。结果1、研究结果表明,与对照组相比,敲低lnc-mg后,形成的My HC阳性肌管数量减少,成肌性marker基因Myod和Myog的表达水平下调;过表达lnc-mg后,形成的My HC阳性肌管数量增多,成肌性marker基因Myod和Myog的表达水平上调。2、芯片结果表明,在成肌细胞中敲低lnc-mg后mi R-125b表达水平上调,而过表达lnc-mg后mi R-125b表达水平下调;并且在成肌分化过程中lnc-mg表达水平升高,而mi R-125b表达水平下降。3、研究发现lnc-mg分子上存在mi R-125b的潜在结合位点;双荧光素报告实验证实mi R-125b可以降低Luc-lnc-mg报告基因的荧光素酶活性,而mi R-125b突变体对Luc-lnc-mg报告基因的荧光素酶活性无影响。4、Ago2免疫共沉淀实验表明,Ago2磁珠捕获的复合物中包含lnc-mg和mi R-125b;生物素标记的核酸捕获实验发现,生物素标记的mi R-125b(bio-mi R-125b)可以捕获lnc-mg,而突变后的bio-mi R-125b不能捕获lnc-mg。5、Western Blot和ELISA结果表明,与对照组相比,过表达lnc-mg后,mi R-125b靶基因Igf2表达水平上升;敲低lnc-mg后,mi R-125b的靶基因Igf2表�

关 键 词： 成肌分化 竞争性内源 胰岛素生长因子

领　　域： []