导　　师： 李坤寅

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 广州中医药大学

摘　　要： 目的:　　研究加味芍药甘草汤通过介导miR-27a调控P53/EGFR/STAT3信号通路来治疗子宫腺肌病的干预机制，从分子水平上阐释加味芍药苷草汤治疗子宫腺肌病的深层机理，为进一步研究加味芍药苷草汤有效作用部位和临床优化处方提供实验基础。　　方法:　　1.选择自2015年9月至2016年5月在广州中医药大学第一附属医院住院并接受手术治疗的子宫腺肌病患者共10例，取其病灶组织进行细胞培养。　　2.以免疫化学法鉴定所培养的原代细胞;MTT法和流式细胞技术检测细胞的增殖情况、细胞周期分布和凋亡率;划痕实验以检测细胞的体外迁移能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中p53-273H、LIF、EGFR、p-EGFR、c-Src、STAT3、p-STAT3、COX-2的表达;RT-qPCR技术检测细胞中p53-273HmRNA、LIFRmRNA、miR-27a、EGFRmRNA的表达。　　结果:　　1.本研究共收集了10例子宫腺肌病病灶组织，均培养成功。原代细胞培养24h后，其中的间质细胞基本贴壁，呈梭形排列;腺上皮细胞则呈漩祸状排列;平滑肌细胞呈长梭形或椭圆形，呈放射、平行排列。　　2.经免疫化学法（角蛋白、波形蛋白、平滑肌肌动蛋白）的鉴定，所培养的10例原代细胞为子宫腺肌细胞。　　3.各组细胞在相应药物处理24h、48h后增殖抑制率(IR％)的情况为:加味芍药甘草汤高、中、低浓度组对子宫腺肌病病灶细胞的IR与阳性组和空白组相比较具有显著差异(P＜0.01)，且加味芍药甘草汤高、中、低浓度组对子宫腺肌病病灶细胞的IR与用药时间呈正相关。　　4.各组药物作用24H、48H后，加味芍药甘草汤高、中、低浓度组细胞的凋亡率高于空白组，其中加味芍药甘草汤高浓度组分别与阳性组(P＜0.05)和空白组(P＜0.01)相比较，其差异具有统计学意义。同时，加味芍药甘草汤高、中、低浓度组处于G1/S期的细胞明显高于空白组，P＜0.

关 键 词： 子宫腺肌病 原代细胞培养 加味芍药甘草汤 角蛋白 波形蛋白 平滑肌肌动蛋白 信号通路 药理作用

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