导　　师： 向国安

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 目的：　　本课题通过体外和体内实验两方面研究异泽兰黄素对肝细胞癌生物学行为的影响，旨在阐明异泽兰黄素抗肝细胞癌的作用机制。　　方法：　　(1)以甲醇浸渍法提取艾叶中的总黄酮成分。用筛选出的最佳实验条件采用高效液相色谱法提取艾叶总黄酮成分中的异泽兰黄素。　　(2)采用不同浓度异泽兰黄素作用于SMMC-7721细胞，随后进行细胞毒性实验、细胞克隆形成实验、细胞增殖检测、流式细胞术、western blot法检测细胞中p53、TopoⅡα、Bcl-2、caspase-3、p-IRE1、p-JNK、MCP-1蛋白的表达。　　(3)采用SMMC-7721细胞经皮下注射构建裸鼠移植瘤模型。选取24只荷瘤裸鼠，用不同浓度异泽兰黄素经腹腔注射裸鼠，计算不同时间点各组裸鼠移植瘤的体积，绘制生长曲线;称取肿瘤重量，计算抑瘤率;免疫组化法检测各组裸鼠移植瘤中p53、TopoⅡα和Bcl-2蛋白的表达;采用western blot法检测各组裸鼠移植瘤中p-IRE1、p-JNK、MCP-1蛋白的表达。　　结果：　　(1)经筛选最终确定高效液相色谱的最优组合为：色谱柱为TIANHE C18（250mm×4.6mm，5μm）、流动相为乙腈∶水∶2％冰醋酸(64∶36∶2)、萃取剂为甲醇、超声时间为60min、柱温为30℃、流速为1.0mL/min，待测样品溶液进样量为10μL。　　(2)实验结果表明，随着异泽兰黄素作用于SMMC-7721细胞浓度的升高，毒性作用逐渐增强，克隆形成数量逐渐下降，增殖抑制率以及凋亡率均逐渐升高(P＜0.05)，western blot结果显示各浓度异泽兰黄素组细胞中p53、caspase-3、p-IRE1、p-JNK、MCP-1蛋白的表达量均明显高于DMSO组(P＜0.05)，TopoⅡα和Bcl-2蛋白的表达量均明显低于DMSO组(P＜0.05)，上述均呈剂量依赖性。　　(3)本实验构建的24只人肝癌SMMC-7721细胞移植瘤裸鼠均全部成瘤。不同时间点异泽兰黄素处理组的裸鼠瘤体体积均明显小于对照组(P＜0.05);�

关 键 词： 艾叶提取物 异泽兰黄素 肝细胞癌 抗肿瘤作用

领　　域： [] []