导　　师： 卢群

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广东药科大学

摘　　要： 目的:1、明确藁本内酯（Z-ligustilide,LIG）对大鼠血管平滑肌细胞（Vascular Smooth Muscle Cells,VSMCs）迁移的作用。2、研究LIG抑制VSMCs迁移的分子机制:探讨LIG对c-Myc、MMP2表达的影响以及c-Myc与MMP2的关系。探讨LIG对ROCK、JNK表达的影响以及ROCK与JNK的关系。方法:1、利用CCK-8实验测定血管紧张素-II（Angiotensin-II,Ang-II）以及LIG对VSMCs的毒性。2、利用Ang-II诱导VSMCs迁移,构建细胞迁移模型。3、运用细胞划痕实验、Transwell细胞迁移实验测定LIG对Ang-II诱导的VSMCs迁移的影响。4、荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测LIG对Ang-II诱导的VSMCs迁移时c-Myc、MMP2、ROCK及JNK表达的变化。5、Transwell细胞迁移实验和蛋白免疫印迹法评估c-Myc抑制剂、ROCK抑制剂对VSMCs的迁移能力的影响,及c-Myc、MMP2、ROCK、JNK表达的变化。结果:1、构建了Ang-II诱导VSMCs过度迁移的模型,在浓度为2μg/mL作用时间24 h以内诱导细胞过度迁移的效果最明显（过度迁移率为38%5.4%,P<0.05）,细胞状态良好,无细胞毒性且稳定,可以作为构建VSMCs迁移模型。2、LIG能有效抑制Ang-II诱导的VSMCs迁移,在2.5～10μg/mL时呈浓度依赖关系。当浓度为10μg/mL作用12 h,抑制细胞迁移率达到49%（P<0.05）。3、LIG能使Ang-II诱导细胞迁移时细胞内c-Myc、MMP2高表达的下调,差异具有统计学意义（P<0.05）。抑制剂10058-F4抑制c-Myc表达后,Ang-II诱导的VSMCs中MMP2的表达下降,且细胞迁移率下降（P<0.05）。提示LIG可能通过调控c-Myc/MMP2信号通路来抑制Ang-II诱导的VSMCs迁移。4、LIG能使Ang-II诱导VSMCs迁移时细胞内ROCK、JNK高表达的下调。抑制剂Y-27632抑制ROCK后,Ang II诱导的VSMCs中JNK的表达下降,且细胞迁移率下降（P<0.05）。提示LIG可能通过调控ROCK/JNK信号通路来抑制Ang II诱导的VSMCs迁移。结论:LIG能有效抑制Ang-II诱导的大鼠VSMCs的迁移,在2.5～10μg/mL时抑制效果成剂量依赖性,10μg/

关 键 词： 藁本内酯 细胞迁移 血管平滑肌细胞 血管紧张素

领　　域： []