导　　师： 张思毅

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 第一章：miRNA-125a抑制喉癌细胞增殖的研究　　研究目的：本课题组前期研究初步发现过表达的miRNA-125a可以抑制喉癌Hep2细胞株的增殖。本章研究通过一系列体外细胞功能试验进一步深入研究miRNA-125a对喉癌Hep2及FaDu细胞株增殖的影响，寻找其可能的靶基因。　　方法：喉癌Hep2及FaDu细胞株，分别转染miRNA-125a模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)。应用克隆形成实验、软琼脂集落形成实验观察miRNA-125a过表达或抑制对喉癌Hep2及FaDu细胞增殖的影响;通过Brdu、流式细胞术等实验分析miRNA-125a过表达或抑制对喉癌Hep2及FaDu细胞周期的影响;综合运用了westernblot、qRT-PCR技术和双荧光素酶活性测定实验研究喉癌细胞中miR-125a对于可能的靶基因的调控作用;最后在细胞水平通过MTT实验、克隆形成实验和软琼脂集落形成实验观察沉默表达靶基因ErbB3后细胞增殖能力的变化。　　结果：克隆形成实验、软琼脂集落形成实验均提示miRNA-125a表达对喉癌Hep2及FaDu细胞增殖能力有显著的抑制作用;Brdu实验表明miR-125a可降低喉癌Hep2及FaDu细胞株中S期细胞的比例，提示miR-125a可能通过阻滞细胞周期，抑制喉癌细胞增殖;流式细胞术结果提示miR-125a可使喉癌Hep2及FaDu细胞株停滞在G0/G1期，S期和G2/M期细胞减少;通过westernblot、qRT-PCR技术和双荧光素酶活性测定等，我们发现miR-125a对ErbB3有直接的负调控作用，miR-125a能够显著抑制ErbB3的表达水平从而抑制喉癌细胞的增殖作用。最后我们再用MTT实验、克隆形成实验、软琼脂集落形成实验验证了转染miR-125a-inhibitor，沉默表达靶基因ErbB3后相比于表达组，对喉癌细胞增殖作用明显受到抑制。　　结论：miR-125a在喉癌组织中表达下调，提示了其在喉癌可能发挥抑癌基因的作用;miR-125a可能是通过作用于其下游的靶基因ErbB3对喉癌的增殖起抑制作用;miR-125a可

关 键 词： 喉鳞癌 细胞增殖 细胞周期 淋巴结转移