导　　师： 王菊芳;康可人

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南理工大学

摘　　要： 多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)是一类进展性、致命的疾病,其主要特征是骨髓中的浆细胞恶性增殖及抗体或者轻链蛋白过度表达,此类疾病严重影响着人类生存质量及预期寿命,针对此类疾病的治疗目前主要以化学小分子药物为主的化疗,此类药物化疗及放疗的毒副作用明显。尽管近年来针对MM的药物极大地改善了总生存期(OS),但MM仍是不可治愈的,MM病人的需求远未得到满足。白细胞分化群38(cluster of differentiation 38,CD38)在淋巴、骨髓细胞以及非造血细胞来源的某些组织低表达;在多发性骨髓瘤恶性肿瘤细胞上高表达。从CD38在细胞信号传导中扮演的角色表明,在MM的治疗中,CD38具有作为单克隆抗体药物靶点的价值。本论文利用真核表达系统制备了CD38胞外蛋白(CD38 ECD)及CHO-CD38FL全长稳定细胞系。将蛋白、细胞系交替免疫BALB/c小鼠,血清效价满足要求后用微量蛋白免疫脾脏,处死小鼠取脾脏分离B细胞,在PEG作用下与骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag14融合,分别用蛋白(CD38 ECD)、细胞(CHO-CD38FL、Daudi)通过ELISA、流式细胞仪进行筛选,阳性杂交瘤经过2轮有限稀释得到亚克隆细胞系。将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔,制备腹水,得到鼠源抗体。利用流式细胞仪测定了抗体与CD38阳性肿瘤细胞Daudi的亲和力,同时用Fortebio测定抗体于CD38 ECD的亲和力,在体外水平评价了蛋白的抗体依赖的细胞毒效应(ADCC)及补体效应(CDC)。提取杂交瘤细胞总RNA反转录为cDNA,分别在轻链、重链前导肽序列及恒定区序列设计简并引物,通过PCR扩增得到目的基因,与T载体连接、转化、测序得到鼠源序列。abysis、Ig blast数据库比对,确定轻链、重链的CDR区、FR区及可变区家族类型,在IMGT免疫蛋白数据库比对鼠源FR区、人FR区,找到同源性最高的人FR区,保留鼠源CDR区,用人FR区取代鼠源FR区实现抗体人源化,测定了人源化后的抗体的亲

关 键 词： 单克隆抗体 亲和力 抗体依赖细胞毒作用 补体效应 人源化

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