导　　师： 冯冰虹

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 广东药科大学

摘　　要： 目的:小分子化合物N2E(N-(2-乙氧基苯基)-N’-羟基辛二酰胺)是SAHA的同源异羟肟酸衍生物,对HDAC的抑制作用较SAHA强。本实验将应用于治疗肝纤维化的相关研究,评价N2E的治疗肝纤维化作用效果,阐明其可能的作用机制,为今后的药物研究打下一定的实验和理论基础。方法:1.N2E抗动物肝纤维化模型实验:C57小鼠70只,随机均分7组,即阴性对照组、肝纤维化模型组、N2E三个剂量治疗组(10mg/kg、20 mg/kg、40mg/kg)、阳性药物对照组SAHA(40mg/kg)以及阳性药物对照组水飞蓟宾(40mg/kg)。除阴性对照组外,其它组小鼠腹腔注射20%CCl,每周2次,持续6周,同时治疗组隔天同体积灌胃给药,直至6周实验结束停止给药。实验结束后24h,收集血样,检测其血清ALT、AST的活力;收集肝脏标本,检测肝组织的羟脯氨酸水平以及通过组织病理观察、天狼星红染色观察肝纤维化的情况;通过免疫组化检测肝纤维化进程。2.流式细胞仪检测N2E对细胞周期和凋亡的影响;Annexin V-FITC/PI双染法检测N2E诱导LX-2细胞凋亡的作用;再通过线粒体膜电位检测以及Caspase-3活性试剂盒检测N2E对LX-2细胞凋亡作用。3.利用免疫组化染色方法在肝纤维化临床样本中,验证HDAC3基因的蛋白水平,并进一步分析HDAC3表达水平与肝纤维化的相关性;通过LX-2的总RNA提取和荧光定量PCR验证N2E作用后的mRNA表达水平。4.Western blotting检测N2E对LX-2细胞肝纤维化相关蛋白的表达影响;使用PDGF-BB对LX-2刺激激活后,免疫印迹法检测其对HDAC3、以及TGF-β1信号通路相关蛋白表达的影响。结果:1.HE染色和天狼星红染色均显示了N2E显著减弱CCl引起的慢性肝纤维化,与模型组比较,N2E组纤维化程度有了明显的下降趋势(p<0.001),N2E修复程度强于阳性药物SAHA组以及水飞蓟宾组;相较于模型组,N2E能明显降低肝纤维化小鼠血清ALT和AST水平以及组织羟脯氨酸的含量,差异具有统计�

关 键 词： 乙氧基苯基 羟基辛二酰胺 组蛋白去乙酰化酶 肝纤维化 肝星状细胞

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