导　　师： 李明亚

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广东药科大学

摘　　要： 去氢骆驼蓬碱(harmine, HM)是从维药骆驼蓬中分离得到的一种β-咔波啉类生物碱，是骆驼蓬抗消化道肿瘤的主要活性成分之一，然而其抗消化道肿瘤的机制还不清楚。本论文主要研究了去氢骆驼蓬碱对人胃癌细胞 MGC-803及 SGC-7901的细胞毒作用及其分子机制。　　本研究以两株人胃癌细胞 MGC-803及 SGC-7901作为细胞模型，用不同浓度HM(0、10、20、40、80μM)分别作用细胞24 h、48 h及72 h后，在相差显微镜下观察两株胃癌细胞的增殖情况及形态学改变，并利用MTT法检测HM对胃癌细胞的细胞毒作用。通过对胃癌细胞转染GFP-LC3质粒用以检测细胞自噬的发生，Western blot技术检测自噬相关蛋白(LC3、p62及 Beclin-1)，及其自噬重要调控通路Akt/mTOR/p70S6K上下游的蛋白表达情况，从而阐明 HM对人胃癌细胞的诱导产生的自噬现象及机制。同时用Annexin V/PI双染检测肿瘤细胞凋亡发生情况，结合JC-1染色及Western blot技术，综合检测线粒体膜电位及凋亡相关蛋白PARP、线粒体途径相关蛋白caspase3、caspase9活性形式的生成情况及Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。HM联合自噬抑制剂3-MA及BafA1作用胃癌细胞后观察细胞存活状态，从而进一步了解自噬在HM对人胃癌细胞产生的细胞毒作用中扮演的角色。通过Akt/mTOR通路抑制剂 LY294002与 HM合用，检查自噬及凋亡相关蛋白的变化，更进一步确定Akt/mTOR/p70S6K通路在此过程中的作用。　　结果发现，HM以0、10、20、40、80μM分别作用两株胃癌细胞24 h、48 h、72 h后，随着HM的剂量增加，与空白组比较后，发现HM组的细胞数显著减少，细胞间的间隙增加，且在高剂量(40、80μM)下，细胞出现皱缩、碎片，高倍显微镜下可观察到细胞内充斥小泡，可能为凋亡小体。MTT结果显示，相同剂量 HM作用两株胃癌细胞24 h、48 h、72 h后，均呈现时间依赖性的抑制胃癌细胞生长。A

关 键 词： 去氢骆驼蓬碱 胃癌细胞 线粒体通路 细胞毒作用 活性成分

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