导　　师： 黄宏靓

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广东药科大学

摘　　要： 随着人们生活方式及饮食结构的改变,非酒精性脂肪肝(NAFLD)的发病率正在不断上升。NAFLD已成为全球公共卫生问题,其病理特征包括单纯性的脂肪病变、非酒精性脂肪肝炎、肝纤维、肝硬化甚至肝癌,然而目前还没有任何治疗药物批准上市。在NAFLD发病机理中,氧化应激是导致肝细胞凋亡或坏死的主要因素。因此,针对肝细胞氧化应激的调控有望成为干预NAFLD病理进程的有效策略。迷迭香酸是从迷迭香属植物提取的功能很强的抗氧化剂,前期研究表明迷迭香酸可减轻肝细胞氧化损伤从而减少NAFLD的发生,但其分子作用保护机制尚不清楚,仍需进一步探究。本文通过建立HO诱导的LO2肝细胞株的氧化损伤细胞模型,来评价迷迭香酸在氧化损伤的肝细胞中的保护作用及机制。实验按如下分成四组并处理:(1)Control组:正常对照组(2)Vit.C组:维生素C+HO组(3)HO组:HO损伤组(4)RA(RA0.25、RA1.00、RA5.00)组:迷迭香酸(0.25、1.00、5.00μM)+HO组。在迷迭香酸和维生素C预处理LO2细胞24 h后,弃去原培养液,加入HO培养6 h。利用CCK-8比色法检测各组细胞存活率,接着用流式细胞术检测迷迭香酸对细胞活性氧(ROS)含量、细胞凋亡、细胞周期阻滞和线粒体膜电位的影响,并依次用DCFH-DA染色法、DAPI染色法、β-半乳糖苷酶染色法观察细胞ROS含量密度、凋亡比率和氧化酶的含量密度。最后用Western blotting检测调控氧化应激水平的相关蛋白的表达变化,包括MAPK通路蛋白(JNK、ERK、p38)、Nrf2通路蛋白(Nrf2、NQO1)、线粒体凋亡通路蛋白(Bcl-2、caspase-3、Bid、Bax、)。结果显示:与HO损伤组相比,迷迭香酸处理组细胞存活率明显增加,细胞凋亡比例减少;同时流式细胞术分析和荧光显微镜细胞ROS含量、细胞β-半乳糖苷酶含量和细胞G/M期周期阻滞比例降低;Western blotting分析中细胞MAPK通路、Nrf2通路和线粒体凋亡通路等相关蛋白

关 键 词： 迷迭香酸 氧化应激 细胞

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