导　　师： 徐汉虹

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 氨基酸导向农药杀虫剂是将天然氨基酸与杀虫活性分子拼接的药物。本文采用拟南芥氨基酸转运蛋白LHT1突变体（LHT1-KO）、野生型（WT）和过表达（35S-LHT1）植株，对系列氨基酸偶合物进行根部吸收输导实验，筛选出能够被LHT1蛋白转运的药物，进一步在细胞电生理水平上证明LHT1参与介导拟南芥根部吸收转运氨基酸导向农药的过程。　　植株水平筛选试验，筛选出根部吸收较好的药物，并在三种基因型中进行差异吸收，结果甘氨酸甲酯-氯虫苯甲酰胺（CAP-Gly-2）能被三种基因型拟南芥根部差异吸收，其中35S-LHT1总吸收量最高，达到了321.38±22.43 nmol/g，而WT根部吸收输导至茎叶的C AP-Gly-2占总吸收量最高。结果表明， LHT1参与拟南芥根部吸收C AP-G ly-2这一过程，但可能未参与C AP-Gly-2输导至茎叶。　　氮饥饿试验中，用30μM CAP-Gly-2代替培养基的氮源。检测三种基因型拟南芥中C AP-G ly-2含量，总吸收量减少，仍有显著差异;C AP-G ly-2从根输导至茎的百分比增加，但仍没有显著差异。这一结果，进一步验证 LHT1介导拟南芥根部吸收C AP-G ly-2。　　在吸收抑制实验中，利用LHT1的底物甘氨酸Gly、氧化磷酸化的解偶联剂CCCP和跨膜运输抑制剂对氯高汞苯磺酸pCMBS与CAP-Gly-2共培养，检测对拟南芥根部吸收 CAP-Gly-2的抑制作用。结果显示，CCCP和 pCMBS对 LHT1-KO根部吸收CAP-Gly-2没有显著抑制作用;而在WT和35S-LHT1中，CCCP和pCMBS对根部吸收均有抑制作用，最高分别为54.90%和52.17%。竞争抑制试验显示，在 LHT1-KO中没有显著抑制作用;在WT中，30μM和100μMGly对CAP-Gly-2的抑制率分别为62.76%和70.47%;在35S-LHT1中，两种浓度的Gly对CAP-Gly-2的抑制率分别为52.92%和44.78%。这一结果证明拟南芥根部吸收 CAP-Gly-2这一过程是载体介导的主动转运;C AP-G ly-2与G ly有相似的底物特性，则参与介导C AP-G ly-

关 键 词： 植物模型 氨基酸转运蛋白 杀虫活性 农药吸收

领　　域： []