导　　师： 吴晖; 李小林

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南理工大学

摘　　要： 野葛根为豆科植物野葛藤Pueraria Lobata(willd.)Ohwi的干燥根。本文以野葛根为原料,从中分离纯化出两种水溶性活性多糖GE-1及GE-2,并分别从结构,免疫调节活性方面对其进行比较。结果表明:采用乙醇回流法除去野葛根中黄酮类物质,采用酶解法除去野葛根中的淀粉及纤维素,采用Sevag法除去蛋白质,采用“水提醇沉法”获得野葛根中水溶性粗多糖,经阴离子交换柱层析DEAE-Sepharose Fast Flow和葡聚糖凝胶柱层析Sephacryl S-200 HR分离纯化后得到GE-1和GE-2两个组分。其中GE-1为中性多糖;GE-2为酸性多糖,糖醛酸含量为1.5%。经测定,野葛根多糖GE-1的分子量为9.9kDa,GE-2分子量为12.3kDa;扫描电子显微镜显示,GE-1为网状结构,表面有细微的孔;GE-2为表面光滑无凸起的条带状结构。紫外全波段扫描显示GE-1及GE-2均不含蛋白质及核酸类物质,不属于糖蛋白。红外光谱扫描显示,GE-1及GE-2均含有多糖特征吸收峰,且只含有α型吡喃糖,不含α型呋喃糖。单糖组成分析表明GE-1及GE-2均由葡萄糖组成,不含其它种类单糖。高碘酸氧化,Smith降解及甲基化结果表明GE-1含有1,4-Glcp和1,6-Glcp糖苷键,两者之间的摩尔比为1.72:2.64。GE-2中含有1,3-Glcp,1,4-Glcp,1,3,6-Glcp及1,6-Glcp四种糖苷键,各糖苷键之间的摩尔比为1.90:5.52:1.43:2.45。一维核磁共振分析显示,GE-1是由→4)-α-D-Glc(1→和→6)-α-D-Glc(1→糖残基组成的直链结构;GE-2含有分支结构,直链由→3)-α-D-Glc(1→,→4)-α-D-Glc(1→及→3,6)-α-D-Glc(1→三种糖残基组成,支链由→6)-α-D-Glc(1→糖残基组成。GE-1及GE-2均具有免疫调节活性,均能促进小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌细胞因子NO、TNF-α和IL-6。但GE-1的促进效果非常微弱,GE-2的促进效果较强。GE-2能特异性地与小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞膜表面受体SR,GR及TLR4相互作用,激活免疫应答,从而影响细胞因子NO、TNF-α和IL-6的分泌。更多还原

关 键 词： 野葛根多糖 提取纯化 结构鉴定 小鼠巨噬细胞 免疫调节活性

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