导　　师： 夏云;王军义

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 广东药科大学

摘　　要： 目的噪声性听力损失（noise-induced hearing loss,NIHL）是最常见的职业病之一,氧化应激产生的高水平活性氧（氧自由基,reactive oxygen species,ROS）不仅是NIHL耳蜗毛细胞损伤的重要机制,也是多种感音性耳聋的基本病理基础。Prestin蛋白是耳蜗外毛细胞所特有的重要感音功能蛋白,是动物毛细胞电运动及耳蜗放大效应的分子基础。本研究通过探索氧化应激状态下ROS对毛细胞株HEI-OC1（House Ear Institute-Organ of Corti 1）Prestin表达的影响及氧化应激状态下Prestin基因的转录调控分子机制,为NIHL的防治提供理论依据。方法用含四种不同浓度（0μM、50μM、100μM、200μM）叔丁基过氧化氢（t-BHP）的培养基培养HEI-OC1细胞24 h或48 h,构建氧化应激损伤细胞模型;用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）、蛋白免疫印迹法（Western Blot）测量氧化应激状态下HEI-OC1细胞Prestin在mRNA与蛋白质水平的表达量,观察氧化损伤对其表达的影响;reverse ChIP（反向染色质免疫共沉淀）与液相色谱-质谱联用（LC-MS）实验技术识别Prestin基因启动子区域结合蛋白,并从中筛选出具有转录调控作用的转录因子,根据各转录因子在氧化应激状态下mRNA的表达水平变化量,确定最重要的参与Prestin基因转录调控的转录因子并进行后续验证;染色质免疫沉淀联合定量PCR实验（ChIP-qPCR）被用来验证转录因子与Prestin基因是否可相互结合;针对转录因子设计3条siRNA（small interfering RNA）片段转染至HEI-OC1细胞内,筛选出干扰效果最好的siRNA片段,再对比转录因子沉默组与对照组Prestin的表达变化判断转录因子对Prestin基因的调控作用。结果氧化应激状态下HEI-OC1细胞Prestin蛋白表达量随t-BHP染毒浓度的增加而降低（24 h:F=201.541,P＜0.05;48 h:F=151.169,P＜0.05）,而Prestin mRNA表达量出现上升（24 h:F=38.709,P＜0.05;48 h:F=59.125,P＜0.05）,且相同浓�

关 键 词： 噪声性听力损失 氧化应激 转录调控 细胞

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