导　　师： 楼步青

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广州中医药大学

摘　　要： 目的:　　茶枝柑为芸香科(Rutacae)柑橘属(Citrus)植物，其外层果皮制干，陈化3年以上即为广陈皮，具有理气健脾、和胃止呕、燥湿化痰、疏肝利胆、解结化痈等多种功效。其果肉富含糖类、有机酸、天然维生素等营养物质，同时可作为陈皮茶、添加剂和香料等，具有很高的食用价值。作为广东道地药材的广陈皮，是临床用药的首选药材，开发前景广阔。但由于广陈皮与一般陈皮在市场上价格差异极大，因此市场上多有一般陈皮冒充广陈皮的现象。陈皮与广陈皮的区分主要以产地来分的，广陈皮主产于广东新会、四会等地，陈皮则主产于福建、湖南、江西、重庆、湖北、四川等地。而现有的性状、显微等鉴别方法以及检测陈皮指标性成分等，不适于快速准确鉴别广陈皮与一般陈皮。因此为确保陈皮药材质量稳定可控和临床用药安全有效，建立快速准确鉴别茶枝柑与其他柑橘品种的方法是亟待解决的问题。　　方法:　　本研究采用了ISSR分子标记对茶枝柑及近缘种共38份材料进行区分;对比SCoT分子标记和ISSR分子标记的鉴别优势;同时探索SCoT结合克隆测序对物种鉴定的可行性;寻找适合茶枝柑及近缘种鉴别的通用条形码;以及尝试在分子角度上区分茶枝柑的驳枝和芽枝;最后对茶枝柑果皮的DNA提取方法优化，尝试对比不同贮存年限茶枝柑果皮的DNA含量变化，将茶枝柑果皮与叶的基因序列进行对比验证，以期为今后市场上流通的各类陈皮进行准确鉴别。　　结果:　　1.采用L16正交设计法对茶枝柑的ISSR反应体系进行优化，最终优化结果为1×PCR buffer,1.5mmol/L Mg2+,0.2mmol/L dNTPs,0.3μ mol/L primer,0.5U Taq酶，50ng模板DNA。通过筛选退火温度及多态性验证后，筛选了11条ISSR引物，共扩增了2126条条带，多态性达到100％，同时通过UPGMA聚类分析将茶枝柑及近缘种38

关 键 词： 茶枝柑 近缘种 分子鉴别 药材鉴定