导　　师： 王晨虹

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 目的：我们的研究目的是评估子痫前期患者Treg细胞比率降低的调控机制，探讨子痫前期中microRNA-210(miR-210)基因表达水平，研究目的证实miR-210通过下调靶基因Foxp3来调节Treg细胞，进而揭示了miR-210在子痫前期中的调控机制。　　方法：采用酶联免疫吸附法检测子痫前期29例、正常孕妇27例及健康非妊娠妇女20例血清细胞因子(IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β1)的表达水平。采用流式细胞术分析外周血CD4+CD25+CD127low/-细胞。选择与上一组相同子痫前期29例、正常妊娠27例胎盘组织，提取总RNA，逆转录成cDNA，采用实时定量PCR方法，检测胎盘组织中Foxp3和RORc、miR-210的表达水平。蛋白质印迹法检测胎盘中Foxp3蛋白的表达。将具有miR-210结合位点的Foxp33'UTR序列（WT野生型，Mut人工突变型）克隆到psiCHECK-2荧光素报告质粒上，分组转染293T细胞，应用promega公司的双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性值，证明Foxp3是miR-210的直接靶基因。采用基因多态性分析方法，对203例子痫前期和243例正常孕妇确定基因型和等位基因变异。从静脉血DNA中提取Foxp3SNPs4个位点和TGF-β1SNPs3个基因位点进行分析。采用多重聚合酶链反应和连接酶检测反应对Foxp3和TGF-β1基因进行基因分型。　　结果：①子痫前期患者血清IL-6、IL-17和TGF-β1浓度较正常孕妇明显升高(IL-6，P=-0.0021;IL-17，P=-0.015;TGF-β1，P=0.019)，Treg细胞因子IL-10水平低于正常孕妇(IL-10，P=0.0012)，差异有显著性(P＜0.05）。　　②子痫前期患者外周血CD4+CD25+CD127-/CD4+T细胞百分率明显低于正常妊娠组(6.34±0.28％vs.9.10±0.28％，P＜0.001)，低于健康非妊娠妇女(6.34±0.28％vs.8.74±0.54％,P＜0.001)。　　③子痫前期患者胎盘组织中表现为Foxp3mRNA水平明显低于正常孕妇(0.713±0.088vs.1.105±0.136，P=0.019)。子痫前期患者的RORc mRNA水平明显高于正常孕妇(

关 键 词： 子痫前期 发病机制 非编码单链 基因 基因调控 细胞