导　　师： 周元平;彭雁忠

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 目的：原发性肝细胞癌发病率高，且较早发生转移，预后较差。研究原发性肝细胞癌转移的机制具有较高的基础和临床意义。既往研究表明，血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ，AngⅡ)可以促进乳腺癌和胃癌的转移，但在肝癌中研究不多。高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1，HMGB1)在肿瘤中的作用在近年来多有被关注。本课题旨在明确AngⅡ对肝癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition，EMT)的促进作用，明确高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1，HMGB1)是否可以调控AngⅡ对肝癌细胞侵袭和迁移的作用。最后，筛选出可能影响HMGB1启动子的转录因子，验证AngⅡ刺激下，该转录因子可以使得HMGB1启动子的表达增加。　　方法：1.培养HEPG2，SMMC7721，Huh7细胞，使用AngⅡ刺激细胞，分别用transwell实验检测细胞侵袭能力，划痕试验检测细胞迁移能力，使用westernblot检测EMT相关蛋白e-钙黏蛋白(ecadherin)和波形蛋白(vimentin)的变化，以明确AngⅡ对肝癌细胞的迁移和侵袭能力的促进作用。　　2.分别构建HMGB1过表达载体和HMGB1-siRNA转染肝癌细胞，再次进行迁移、划痕和EMT相关蛋白的检测试验，以明确HMGB1对AngⅡ刺激下肝癌细胞迁移和侵袭和EMT的影响。　　3.使用双基因报告系统检测HMGB1启动子活性，筛查转录因子，分别通过qPCR，WB和ChIP实验确认转录因子和HMGB1启动子之间的关系。　　结果：1.细胞划痕和trans-well结果显示肝癌细胞HepG2、SMMC7721和Huh-7加入AngⅡ后，细胞侵袭性和迁移能力显著增高(P＜0.05);western blot结果显示经AngⅡ处理的肝癌细胞（HepG2、Huh-7、SMMC-7721）中HMGB1表达均上调(p＜0.05)　　2.验证HMGB1在AngⅡ诱导肝癌细胞EMT过程中的作用，首先western blot结果显示与配对癌旁组织相比，HMGB1在人肝癌组织中表达明显上调(p＜0.05)。然后将成功构�

关 键 词： 肝癌 上皮间质转换 血管紧张素 转录因子 高迁移率族蛋白 分子调节机制

领　　域： [] []