导　　师： 唐时幸

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)是引起获得性免疫缺陷综合征(Acquired immunodeficiency syndrome，AIDS，又称为艾滋病)的病原体，HIV感染的潜伏期一般8-10年。传统免疫学方法检测抗HIV抗体，只能判断是否感染HIV，不能区分HIV新发感染，难以准确监测HIV流行趋势及评价干预措施的效果。基于横断面样本估算HIV新发感染率的实验室检测方法在近年来有一定的研究进展，但尚未有公认的金标准。本课题组前期研究发现HIV-1跨膜糖蛋白gp41中57氨基酸多肽（gp41-p57）能够区分HIV-1近期和长期感染，但具体的抗原决定簇氨基酸序列，以及HIV不同基因型氨基酸的差异对检测结果的影响，尚需进一步研究确定。　　研究目的：　　研究gp41-p57多肽抗原在区分HIV-1近期和长期感染中起主要作用的抗原决定簇及其基因型特异性，初步建立基于中国流行的HIV-1基因亚型gp41抗原区分HIV近期和长期感染实验室检测方法，为HIV新发感染率的监测、预防或治疗措施的效果评价提供研究方法和工具。　　研究方法：　　1.基于HIV gp41-p57序列，通过人工合成10条长短不一的系列短肽为检测抗原，以间接ELISA法研究其与HIV-1近期和长期感染样本的免疫反应特征，分析gp41多肽的抗原决定簇。　　2.合成源自中国流行的CRF01_AE、B、CRF07_BC和CRF08_BC四种亚型的gp41-p57多肽，以间接ELISA法研究其与HIV-1不同基因亚型感染样本的免疫反应特征，分析gp41-p57基因型特异性。　　3.构建原核表达载体，通过免疫印迹实验和间接ELISA法分析所纯化目的蛋白的免疫活性，获得包含HIV-1CRF01_AE、B、CRF07_BC和CRF08_BC亚型gp41-p57的融合蛋白MP4。　　4.以融合蛋白MP4为检测抗原，建立区分HIV-1近期和长期感染的间接ELISA法，通过与商品化试剂盒LAg-Avidity EIA检测结果比较，评价所建立方法的灵敏度、特异度

关 键 词： 获得性免疫缺陷综合征 实验室检测 近期感染 长期感染 抗原决定簇 基因型特异性