导　　师： 王通

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 肺癌在中国的发病率和死亡率排名第一。磷酸化蛋白入核是大多信号转导通路的终末事件，从而，假设入核磷酸化蛋白质组可反应肺癌细胞的恶性程度。以往的研究发现，数据非依赖型（Data-independent acquisition,DIA）质谱技术具覆盖度高、重复性好和灵敏度高的特点。因此，利用该技术开展了首个肺癌细胞核磷酸化蛋白质组的DIA质谱分析。　　以上皮样人肺癌H292，以及间质样A549和H1299细胞为研究对象，用TiO2亲和性富集磷酸化肽段。比较了传统稳定同位素二甲基标记和DIA两种质谱分析方法。发现二甲基标记法的蛋白质鉴定重现率只有约40%。而DIA法高达85%以上。经3次独立实验，在对DIA蛋白质组定量结果的聚类分析中，发现核磷酸化蛋白质组具细胞特异性，且A549和H1299的欧几里得距离较近，并与H292细胞分离;该趋势与差异蛋白统计分析一致。在与H292细胞相比显著上调（P<0.01）的核磷酸化蛋白质组中，约60%的蛋白质可形成一个聚类系数约为0.15以及网络中心度低于0.23的异质性网络，预示该网络中存在多个关键节点。与此一致，在上游分析中发现，A549和H1299细胞的特异性入核磷酸化信号由多个上游激酶显著调控。且该过程伴随转录因子复合体整体磷酸化水平上调现象，qPCR结果验证了该转录调控的部分靶基因可显著上调。　　因此，首次报道肺癌细胞的核磷酸化蛋白质组可反应其恶性程度，这些磷酸化蛋白质可由多个上游激酶调控，暗示着肺癌在核信号水平的异质性。

关 键 词： 肺癌 磷酸化蛋白质组 数据非依赖型质谱 恶性程度

领　　域： [] []