导　　师： 吕建秋;孙京臣

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 杆状病毒表达系统（Baculovirus expression vector system，BEVS）作为成熟的真核表达系统，相比酵母表达系统和哺乳动物表达系统，拥有独特的优势。杆状病毒表达系统能够容纳大分子量基因或多个外源基因，而不影响杆状病毒自身基因组的复制;能够对外源蛋白进行糖基化、磷酸化等加工修饰，能够很好地保留外源蛋白的活性;对人、畜无危害，因此广泛的应用于抗体研发等生物技术领域。基于杆状病毒上述优点，杆状病毒展示系统也随之得到长足发展，新型杆状病毒穿梭体（Baculoviurs Plasmid， Bacmid）和 MultiBac多基因高效表达系统的构建，又进一步改善了杆状病毒载体表达系统。　　2001年，Mango r证实，用水泡性口膜炎病毒G蛋白（ VSV-G）替代杆状病毒的囊膜蛋白 GP64，杆状病毒自身的复制周期不受影响，在一定程度上可以替代 GP64蛋白，将外源基因展示在杆状病毒膜表面。论文将VSV-G、GP64以及杆状病毒衣壳蛋白VP39分别和增强型绿色荧光报告基因egfp进行融合表达，利用MultiBac多基因高效表达系统，获得含有融合蛋白的AcBV-pF-p64-his-egfp-vsv-g、AcBV-pF-p64-his-egfp-gp64和AcBV-pF-p64-his-egfp-vp39等三种重组杆状病毒，同时构建了只含有egfp的重组杆状病毒Ac BV-pF-p64-his-egfp作为阳性对照，通过倒置荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察 egfp在 sf9细胞上的定位情况，结果表明 VSV-G展示的EGFP不均匀地分布在细胞膜上，GP64展示的EGFP均匀地分布在细胞膜上， VP9展示的EGFP主要集中在细胞内部。上述结果可为杆状病毒所展示外源蛋白的位置以及其展示方式等研究提供了借鉴。　　论文利用杆状病毒衣壳蛋白VP39进行多基因展示，开展了增强型黄色荧光蛋白eyfp和樱桃红荧光蛋白 mCherry在核衣壳上共展示的研究。分别缺失eyfp、mCherry的终止密码子和 vp39的起始密码子，构建转�

关 键 词： 杆状病毒 外源蛋白 蛋白 蛋白 蛋白

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