导　　师： 谭志远

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 为了有效降解烟叶淀粉，改善烟叶品质和安全性，本研究以广东省烟草南雄科学研究所试验基地的烟叶及其根际土壤为材料，从中分离出具有淀粉降解功能的微生物。通过对分离菌株进行功能筛选，获得兼具耐高温和高产淀粉酶功能的优良菌株，然后对其进行形态学观察，生理生化鉴定和16S rRNA基因序列分析，从而确定菌株种类。将筛选获得的优良菌株在不同pH、接种量、温度和离子成分条件下进行液体发酵，最终确定其发酵的最优方案。　　将获得的优良菌株制备成菌剂YTK1、B5221和YTK1+B5221，均匀喷施于烤前15d，10d，5d和烤前的中部烟叶上，并在不同时间段喷施前测定烟叶淀粉酶活性，硝酸还原酶活性和蔗糖转化酶活性;烤前在未作处理的中部烟叶上喷施一定浓度α-淀粉酶(α)、中性蛋白酶（D）及其混合酶液（α+D）;在烤前，对上述菌剂处理和外源酶处理正交试验。待烤后测定上述各处理烟叶淀粉、蛋白质、总糖和还原糖含量。最后通过测定结果进行差异显著性分析，获得能够有效均衡烟叶内在化学成分的最佳组合。　　上述实验结果如下：　　1.优良菌株的分离与筛选：从中部成熟烟叶及其根际土壤中总共分离得到64株高温菌株，其中从烟叶中分离得到38株，根际土壤分离得到26株。通过耐高温和产淀粉酶筛选，获得两株优良菌株YTK1和B5221，经菌株鉴定，分别为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。菌株YTK1和B5221都可耐受60℃生长且长势良好，均主要产α-淀粉酶，初产淀粉酶活性分别为9.67U·mL-1和9.94U·mL-1。　　2.产酶特性研究：两株芽孢杆菌在不同培养条件下菌体浓度和产胞外淀粉酶活力变化趋势一致，菌株YTK1在pH6.0，接种量2.5%，温度35℃和离子Ca2+、K+、Mg2+发酵条件下菌体浓度和产胞外淀粉�

关 键 词： 淀粉降解功能 解淀粉芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌 产淀粉酶 菌株筛选 烟叶烘烤

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