导　　师： 陈小佳

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 目的：对本课题组之前获得的抗肿瘤小分子短肽P5进行环化，研究环化后的P5肽（命名为DcP5）的稳定性和抗肿瘤活性，并进一步探究其抑制肿瘤细胞的分子作用机制。　　方法：首先，基于P5短肽的氨基酸序列，在其两端分别加上左旋半胱氨酸和右旋半胱氨酸，并化学合成这两种环肽。经分子间亲和力检测后，筛选出亲和力较好的环肽。接着通过酶联免疫法（ELISA）实验检测DcP5环肽的半衰期;通过细胞增殖实验和荷瘤小鼠在体实验，检测DcP5环肽的抗肿瘤能力，并通过对给药裸鼠进行血液生化功能检测和器官组织的分析来评估DcP5环肽的毒副作用。在分子机制研究上，先检测DcP5环肽与其他酪氨酸激酶受体（RTKs）家族成员的分子间亲和力来分析其与其他RTK成员的结合情况，再通过间接免疫荧光检测DcP5环肽与表达FGFR2的DU145细胞的特异性结合情况;同时免疫印迹实验检测DcP5环肽处理癌细胞后胞内信号通路和相关因子的变化情况。　　结果：根据设计方案合成了两条环肽，即通过左旋半胱氨酸环化的LcP5环肽和右旋半胱氨酸环化的DcP5环肽;等温滴定量热实验（ITC）验证了DcP5环肽与FGFR2蛋白具有较高亲和力，而LcP5环肽则较低;ELISA实验检测DcP5和P5在大鼠体内的稳定性，结果表明DcP5环肽的体内稳定性较P5更好。在抗肿瘤活性检测方面，DcP5环肽对前列腺癌细胞DU145的抑制增殖能力比P5短肽好且呈剂量依赖性，且DcP5环肽能抑制荷瘤小鼠DU145细胞实体瘤的生长并有剂量依赖性，且与P5短肽相比，抑制效果相当。荷瘤裸鼠的血常规和肝肾指标显示DcP5环肽无明显的毒副作用，脏器组织的HE染色表明DcP5环肽作用下裸鼠的器官组织无明显病变。在分子机制研究方面，ITC实验结果表明了DcP5环肽与FGFR3，FGFR4，PDGFRa，PDGFRb，HGFR2，HER2，VEGFR2，IGF1R等多个RTK蛋白有强度

关 键 词： 小分子环肽 抗肿瘤活性 稳定性 分子机制

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