导　　师： 王新荣

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 根结线虫（Meloidogyne spp.）是一类非常重要的植物病原线虫，给农业生产造成了巨大经济损失。根结线虫二龄幼虫侵入到寄主植株根系，食道腺分泌物经由口针注入植物细胞中，从而刺激寄主植物根部形成巨型细胞并产生根结。根结线虫食道腺蛋白在线虫与寄主植物蛋白的相互作用过程中发挥着关键作用。在根结线虫刚开始产卵时，巨型细胞逐渐出现空泡化，内含物大幅减少，由此推测根结线虫食道腺分泌蛋白启动了寄主植物的自主凋亡信号转导途径。本研究以南方根结线虫中编码程序性死亡蛋白6（Programmed cell deathprotein6，PDCD6）基因和与之互作的番茄根组织MYB相关蛋白330（Myb-re la ted prote in330-like）基因为研究对象，用双分子荧光互补（bimolecular fluorescence complementation，BiFC）技术研究了 MiPDCD6蛋白和LeMYB330蛋白的相互作用及其互作位点，并对VIGS番茄组培苗的沉默效应进行了研究，为揭示南方根结线虫调控其寄主巨型细胞空泡化的分子机理和抗根结线虫育种奠定了良好的基础。　　本研究主要取得如下创新性结果：　　1、明确了LeMYB330与MiPDCD6基因的亚细胞定位。用基因枪轰击的方法，对LeMYB330与MiPDCD6表达部位进行定位实验，将构建好的GFP-PDCD6重组载体和GFP-MYB330重组载体，分别轰击至洋葱表皮细胞，25℃培养24 h后，在487 nm绿色激发光，10×荧光显微镜下LeMYB330蛋白在细胞核中检测到较为明显的绿色荧光信号，表明该蛋白的表达部位是细胞核;MiPDC D6蛋白在细胞质和细胞核内均检测到较为明显的绿色荧光信号，表明MiPDC D6蛋白的表达部位是细胞质和细胞核。　　2、用BiFC技术证明了LeMYB330与MiPDC D6蛋白的相互作用。将构建好的pUC19-PDCD6重组载体和pUC19-MYB330重组载体，共同轰击至洋葱表皮细胞，25℃培养24h后，487nm绿色激发光，在10×荧光显微�

关 键 词： 番茄 根结线虫 巨型细胞 编码程序性死亡蛋白 相关蛋白

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