导　　师： 郭洪波

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)是颅内恶性肿瘤之首，标准治疗方案为手术切除加术后同步放化疗，患者预后差，中位生存期仅14个月，且极易复发。替莫唑胺(Temozolomide，TMZ)是目前治疗GBM一线化疗药物，TMZ耐药严重制约疗效，已成为导致治疗失败的重要原因。既往研究表明异常表达的LncRNAs参与调控肿瘤放化疗敏感性，提示LncRNAs可能在胶质瘤TMZ耐药中起重要作用。　　通过LncRNAs芯片筛选出差异高表达LncRNA SOX2OT和其邻近基因SOX2，发现二者在耐药细胞中均显著高表达，提示SOX2OT与SOX2可能参与TMZ耐药进程且二者可能存在调控关系;生物信息预测提示SOX2OT与RNA去甲基化酶ALKBH5结合并可能参与SOX2OT调控SOX2过程。本研究假设为ALKBH5介导SOX2OT/SOX2通路调控胶质瘤TMZ耐药。　　目的:　　明确LncRNA SOX2OT在TMZ耐药进程中的作用及其临床意义，并探讨ALKBH5介导SOX2OT调控SOX2表达在胶质瘤TMZ耐药中的潜在分子机制。　　方法:　　qRT-PCR检测LncRNA或mRNA的表达水平;CCK8法与流式细胞术检测沉默SOX2OT或SOX2后耐药细胞对TMZ敏感性及细胞增殖与凋亡的变化情况;FISH实验分析SOX2OT亚细胞定位并采用RNA Pulldown及RIP技术验证SOX2OT与ALKBH5蛋白结合;应用ChIP与EMSA、MeRIP技术分别分析ALKBH5与SOX2的启动子区域结合情况及SOX2的m6A修饰水平变化;应用m6A定量法检测沉默ALKBH5后耐药细胞m6A修饰水平改变。　　结果:　　1、LncRNA SOX2OT在耐药细胞中显著高表达，其高表达与TMZ化疗耐药和胶质瘤WHO分级呈正相关且提示临床预后不佳。　　2、敲低SOX2OT可显著增强耐药细胞对TMZ的敏感性，同时抑制细胞增殖，增加TMZ诱导的细胞凋亡;过表达SOX2OT能增加亲本细胞化疗耐药性，进一步裸鼠成瘤实验体内证实敲低SOX2OT降低耐药细胞耐药性。　　3、邻近基因SOX2在耐药细胞中显著高表达，且其表达量与SOX2OT表�

关 键 词： 脑胶质母细胞瘤 化疗耐药机制 长链非编码核糖核酸 去甲基化酶